![]() Главная страница Случайная страница КАТЕГОРИИ: АвтомобилиАстрономияБиологияГеографияДом и садДругие языкиДругоеИнформатикаИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеталлургияМеханикаОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРелигияРиторикаСоциологияСпортСтроительствоТехнологияТуризмФизикаФилософияФинансыХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника |
Методические указания по выполнению лабораторной работы
Выращивание (культивирование) микроорганизмов широко применяется для выделения, накопления и сохранения их. В лабораторных условиях микроорганизмы выращивают при качественном анализе микрофлоры различных объектов, при количественном анализе — для подсчета жизнеспособных клеток, а в производственных условиях — для накопления полезных человеку микроорганизмов и продуктов их обмена веществ. Среда, используемая в лабораторных условиях для накопления микроорганизмов и продуктов их жизнедеятельности, называется питательной. К питательным средам для выращивания микроорганизмов предъявляют определенные требования: они должны содержать необходимые питательные вещества в легкоусвояемой форме (азотистые, углеводные, минеральные вещества, витамины), должны быть изотоничны по отношению к микробной клетке, обладать буферными свойствами, иметь оптимальную вязкость и определенный окислительно-восстановительный потенциал. Обязательное условие — стерильность питательных сред, поскольку посторонние микроорганизмы изменяют свойства среды и затрудняют культивирование и изучение определенных микробов. Универсальных сред, пригодных для всех видов микроорганизмов, не существует. Отдельные виды микробов в зависимости от особенностей обменных процессов нуждаются в различных питательных веществах и условиях культивирования. В качестве питательной среды в ряде случаев используют натуральные продукты (картофель, молоко и т. д.). Такие среды называются естественными. Однако чаще питательные среды, используемые в лабораторной практике, являются искусственными, т. е. приготовленными в лаборатории специально для данной цели по определенным рецептам. Питательные среды различны по составу, консистенции и назначению. Состав сред. В микробиологической практике широко применяют так называемые простые (или обычные) среды, пригодные для культивирования многих видов микроорганизмов. К простым средам для выращивания бактерий относят мясопептонный бульон (МПБ), мясопептонный агар (МПА). Пептон, мясная вода, входящие в состав этих сред, служат источником азота, углерода, зольных элементов и факторов роста, необходимых для микробной клетки. Простые среды для выращивания микроскопических грибов — неохмеленное пивное сусло и сусло-агар. Сложные среды готовят, как правило, на основе простых, добавляя к ним питательные вещества, необходимые для более требовательных видов микроорганизмов (например, сахарный бульон, кровяной агар и др.). Консистенция сред. По консистенции питательные среды бывают жидкими, полужидкими и плотными. К жидким средам относят мясопептонный бульон, сусло и др. Уплотнение сред достигается добавлением к жидким средам агар-агара и желатина. Агар (по-малайски — желе) — плотный волокнистый материал, получаемый из морских водорослей и образующий в водных растворах плотный гель. Агар растворяется в воде при нагревании и застывает при комнатной температуре. Благодаря способности придавать питательному продукту, консистенцию плотного студня и высокой устойчивости к ферментативному действию микробов агар широко применяется при изготовлении полужидких (0, 5% агара) и плотных (1—2%) питательных сред. Желатин — белковое вещество животного происхождения. Применение его как уплотнителя ограничено из-за низкой (22—27 °С) температуры разжижения. Плотными средами являются, например, мясопептонный агар (МПА), сусло-агар (СА), мясопептонный желатин. Назначение сред. В зависимости от задач исследования, кроме простых сред, используемых для выращивания многих видов микробов, применяют элективные и дифференциально-диагностические среды. При посеве культуры необходимо соблюдать стерильность, т. е. предотвращать возможность загрязнения исследуемого материала и питательных сред посторонними микроорганизмами. Посев осуществляют различными методами в зависимости от его цели: выращивание микроорганизмов в толще среды или на ее поверхности. Для глубинного посева (в толще среды) используют обычно мерные количества плотной среды, заготовленные в пробирках по 10—15 мл. Культуру вносят в пробирки с расплавленным и охлажденным до 40— 45 °С агаром, а затем заливают смесь в чашку Петри. Возможен и другой способ глубинного посева: взвесь микроорганизмов вносят непосредственно в стерильную чашку Петри на дно, слегка приоткрыв крышку, а затем заливают ее расплавленным и охлажденным агаром. Среду с культурой тщательно перемешивают круговыми движениями чашки, не поднимая ее с поверхности стола. После этого чашку оставляют на столе до застывания агара. Для поверхностного роста исследуемый материал наносят на поверхность уже застывшей среды. По пластинке агара материал распределяют с помощью шпателя или бактериологической петли. При посеве шпателем (стеклянной палочкой, согнутой в виде треугольника) чашка с застывшей средой находится на поверхности стола. Левой рукой слегка приоткрывают крышку, а правой вносят на поверхность агара определенное количество (петлю, каплю или определенный объем) культуры, круговыми движениями шпателя распределяют культуру по всей поверхности среды. При использовании бактериологической петли посев осуществляют штриховым способом. Чашку Петри кладут на стол дном кверху и левой рукой поднимают только ее основание со средой; держат дно чашки в руке вертикально, и осторожно, не разрывая среду, сеют культуру петлей зигзагообразными движениями (штрихом).
Литература [1, с.39-58]; [10, с. 32-47]. Вопросы для самопроверки 1. Назовите, что такое обмен веществ. 2. Рассмотрите химический состав микробной клетки. 3. Опишите элементы и вещества необходимы для питания микробов. 4. Опишите, каким образом поступают питательные вещества в клетку. 5. Объясните способность микробов развиваться на сравнительно сухих товарах. 6. Опишите явления тургора, плазмолиза, плазмоптиса. 7. Рассмотрите изменения, которые происходят с веществами, поступающими в клетку из питательной среды. 8. Проанализируйте различия между питанием сапрофитов и паразитов. 9. Приведите химические суммарные уравнения аэробного дыхания. 10. Опишите, что такое ферменты, и каковы их характерные признаки? 11. Рассмотрите роль ферментов в жизни микроорганизмов?
|