Порядок виконання роботи. 1. Приготувати тимчасові препарати бактеріальних клітин

1. Приготувати тимчасові препарати бактеріальних клітин. Для цього використати методику приготування мазка з культури, що вирощена на рідкому живильному середовищі (можна взяти кефір чи сметану).

Для приготування мазка необхідно взяти чисте знежирене предметне скло. На предметному склі визначити склографом місце нанесення матеріалу.

Мікробіологічну петлю прожарити у полум’ї спиртівки, тримаючи її як олівець вертикально у правій руці. Два-три рази проведіть через полум’я і нижню третину петлетримача. Не випускаючи петлі, лівою рукою взяти пробірку з бактеріальною культурою. Пробку пробірки притиснути до долоні 4-м та 5-м пальцями, пробірку повільно крутити колоподібними рухами і витягнути з неї пробку. Край пробірки, не випускаючи пробки, провести через полум’я, петлю ввести у пробірку та охолодити об стінки пробірки. Бактеріальною петлею набрати краплю культури з рідкого середовища із дотриманням правил стерильності і обережно, не торкаючись стінок пробірки, витягнути її. Далі провести пробку і відкритий край пробірки через полум’я, після чого її закрити і поставити у штатив.

Взяту культуру нанести на скло і поступово розтираючи її, приготувати тонкий, рівномірний мазок округлої чи овальної форми діаметром 1–1, 5 см.

Після цього петлю прожарити у полум’ї спиртівки і поставити у штатив.

Висушування мазків. Після приготування мазок висушити на повітрі при кімнатній температурі або в струї теплого повітря над полум’ям спиртівки (виключаючи сильного нагрівання мазка). Потім висушений мазок зафіксувати. Фіксований мазок називають препаратом.

Фіксація мазків. При фіксації мазків відбувається загибель мікроорганізмів, вони краще сприймають барвники, ніж живі, і при фарбуванні не змиваються. Використовують фізичний (над полум'ям спиртівки) та хімічний (фіксуючими рідинами, наприклад, спиртом) способи фіксації.

Фарбування препаратів. При простому методі забарвлення використовують один барвник, наприклад, метиленовий синій, розчин фуксину Пфейфера та ін. Простий метод є орієнтовним і дозволяє виявити мікроорганізми в матеріалі, що мікроскопіюється, визначити кількість, форму та взаєморозташування.

На препарат, що приготовлений з бактеріальної культури, нанести метиленовий синій та фарбувати його 1–2 хвилини, після чого барвник змити водою.

Мікроскопія пофарбованого препарату. Висушений препарат покласти на предметний столик мікроскопу та нанести на нього краплю імерсійної олії. Мікроскопіювати пофарбований препарат дотримуючись всіх правил мікроскопії з використанням імерсійного об'єктива.

2. Роздивитися форми бактеріальних клітин. Препарати замалювати кольоровими олівцями, умовно позначивши поле зору у вигляді кола.

3. Розглянути схему будови прокаріотичної клітини, замалювати її та підписати органели.

4. Розглянути схему будови клітинної оболонки грампозитивних і грамнегативних прокаріот (рис. 5).

5. Зробити загальні висновки. Роботу захистити, здати викладачу.

Питання для самоконтролю

1. Що таке прокаріотична клітина? Наведіть приклади організмів-прокаріотів.

2. Перелічіть структурні компоненти прокаріотичної клітини: поверхневі структури, цитоплазматичні структури, запасні поживні речовини.

3. Порівняйте будову грампозитивних і грамнегативних прокаріотичних клітин.

4. Як готується мазок з бактеріальної культури?