Учет результатов

Положительные образцы содержат специфическую полосу, которая располагается на том же уровне, что и полоса положительного контроля. Отрицательные образцы не содержат каких-либо полос (отрицательный контроль), за исключением полосы праймер–димера, которая располагается ниже первого лидирующего красителя.

Результаты реакции могут быть получены в пределах 5–6 часов при наличии чистой и идентифицированной культуры С.diphtheriае или образца биологического материала. Однако (в случае исследования культур) ее постановка и учет должны сочетаться с проведением теста Элека, т.к. только результаты этого теста дают основание для окончательного ответа о продукции токсина исследуемой культурой. При выявлении гена токсигенности в биологическом материале от больных и носителей с помощью ПЦР проводят исследование бактериологическим методом.

МЕТОДИКИ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БИОХИМИЧЕСКИХ ПРИЗНАКОВ

Биохимические признаки могут определяться по классическим, пробирочным методикам описанным ниже. Лаборатория может использовать микрометод с жидкими дифференциально-диагностическими средами в планщетах для иммунологических реакций. Удобным является использование коммерческих тест-систем, например производства ООО НПО «Диагностические системы» г.Нижний Новгород. Для проведения ускоренной биохимической идентификации С.diphtheriае можно также использовать сухую коммерческую " Микротест-систему для биохимической идентификации коринебактерий дифтерии (МТС–КД) производства НПО " Питательные среды", г. Махачкала, тест-систему для биохимической идентификации производства Санкт–Петербургского НИИЭМ им. Пастера или зарубежных фирм (набор используемых тестов представлен в таблице №12).

Определение цистиназной активности (проба Пизу)

Коринебактерии дифтерии и коринебактерии ульцеранс, в отличие от ложнодифтерийной палочки и других дифтероидов, обладают ферментом цистиназой (см. табл. 11).

Испытуемую культуру засевают уколом в питательную среду для определения цистиназы, разлитую в узкие пробирки столбиком высотой 4 см. В составе питательной среды имеется цистин и уксуснокислый свинец. В процессе роста культура продуцирует цистиназу, расщепляющую цистин, а образующийся при этом сероводород вступает в реакцию с уксуснокислым свинцом, который превращается в сернокислый свинец – соединение темно-коричневого цвета. Коринебактерии дифтерии и коринебактерии ульцеранс вызывают не только почернение среды по ходу укола, но и образуют вокруг него облачко темно-коричневого цвета на расстоянии примерно 1 см от поверхности среды. Результат реакции учитывают через 24 часа. Для получения ускоренного ответа (через 3 часа) среду инокулируют большим количеством культуры. Одновременно с испытуемыми культурами производится посев контрольного штамма в отдельную пробирку.