Зависимость активности амилазы от температуры.

Реактивы: 1. 1% раствор крахмала.

2. Раствор Люголя

3. Дистиллированная вода.

4. 10% раствор НСl

5. 0, 1 Н раствор Н₂SO₄.

Ход работы. В 4 пронумерованные пробирки наливают по 0, 5 мл амилазы. Пробирку №1 ставят в лед, №2 – в термостат при 37⁰С, №3 – оставляют при комнатной температуре, №4 – в кипящую водяную баню. Через 5 минут, когда содержимое пробирок примет нужную температуру, в пробирку №1 добавляют 2 мл 1% раствора крахмала, охлажденного до температуры тающего льда, во 2-ю, 3-ю и 4-ю пробирки добавляют по 2 мл крахмала комнатной температуры. Во все пробирки сразу же добавляют по 2 капли раствора Люголя. 1-ю, 2-ю и 3-ю пробирки помещают в те же условия, 4-ю пробирку оставляют при комнатной температуре. После исчезновения окраски в пробирке №2 в каждую пробирку добавляют по 1 мл 0, 1Н серной кислоты для прекращения действия фермента. Активность амилазы оценивают по конечной окраске содержимого пробирок. Чем выше активность фермента, тем слабее окраска. По полученным результатам построить график зависимости активности амилазы от температуры.

Вопросы к защите лабораторной работы:

1. Какую реакцию катализирует амилаза слюны?

2. Назовите субстраты амилазы.

3. Расскажите о строении субстратов амилазы.

4. Назовите продукты амилазной реакции.

5. Объясните результаты 1-го опыта.

6. С помощью, какой качественной реакции можно обнаружить крахмал?

7. Какой специфичностью обладает амилаза слюны?

8. Обладают ли специфичностью неорганические катализаторы?

9. Объясните результаты 2-го опыта.

10. Что такое денатурация?

11. Подвергаются ли денатурации ферменты? (да, нет; почему?)

12. Для чего необходима инкубация фермента с субстратом?

13. Как можно измерить активность амилазы?

14. Какова зависимость скорости амилазной реакции от концентрации крахмала?

15. К какому классу ферментов относится амилаза слюны?

16. Назовите другие классы ферментов.

5.4. Итоговый контроль знаний:

- вопросы по теме занятия:

1. Что такое ферменты?

2. Чем сложные ферменты отличаются от простых ферментов?

3. Что такое кофактор фермента? Химическое строение кофактора.

4. Чем коферменты отличаются от простетических групп? Приведите примеры.

5. Дайте понятие об активном центре ферментов. Строение активного центра простых и сложных ферментов.

6. Что такое специфичность ферментов? Чем обусловлена специфичность ферментов?

7. Какова зависимость скорости ферментативной реакции от температуры, рН, концентрации фермента и субстрата?

8. Дайте понятие об энергии активации. Как ферменты влияют на нее?

9. Опишите механизм действия ферментов.

10. Приведите классификацию ферментов и дайте характеристику каждому классу.

- ситуационные задачи:

1. Фермент трипсин способен разрывать пептидные связи белков. Почему обработка трипсином приводит к инактивации многих ферментов?

2. Фермент уреаза повышает скорость гидролиза мочевины при рН 8, 0 и 20⁰С в 10¹⁴ раз. Если данное количество уреазы полностью гидролизует данное количество мочевины за 5 минут, то, сколько вре­мени потребуется на гидролиз без уреазы?

3. Может ли обратная реакция катализироваться центром фермента, отличным от центра, катализирующего прямую реакцию?

ТЕСТЫ ДЛЯ КОНТРОЛЯ КОНЕЧНОГО УРОВНЯ ЗНАНИЙ

1.У ПРОСТЫХ ФЕРМЕНТОВ В СОСТАВ АКТИВНОГО ЦЕНТРА ВХОДЯТ

1) нуклеиновые кислоты

2) ионы металлов

3) аминокислоты

4) углеводы

2. У СЛОЖНЫХ ФЕРМЕНТОВ ХИМИЧЕСКИЙ СОСТАВ АКТИВНОГО ЦЕНТРА ПРЕДСТАВЛЕН

1) только аминокислотами

2) аминокислотами и кофактором

3) аминокислотами и углеводами

4) фосфолипидами

3. КОНСТАНТА МИХАЭЛИСА (К_М) ХАРАКТЕРИЗУЕТ

1) сродство фермента к субстрату

2) эффективность активатора

3) эффективность ингибитора

4) сродство фермента к продукту

4. КОНСТАНТА МИХАЭЛИСА – ЭТО

1) концентрация субстрата, при которой скорость реакции является максимальной

2) концентрация субстрата, при которой скорость реакции равна половине максимальной

3) насыщающая концентрация субстрата

4) концентрация продукта

5. АКТИВНЫЙ ЦЕНТР ФЕРМЕНТА – ЭТО

1) участок фермента, отвечающий за связывание субстрата и образование продукта

2) участок фермента, отвечающий за регуляцию активности

3) участок фермента, отвечающий за связывание с клеточными структурами

4) участок фермента, отвечающий за присоединение кофермента

6. Домашнее задание для уяснения темы занятия (см. контрольные вопросы, тестовые задания и ситуационные задачи занятия №2).

7. Рекомендации по выполнению НИРС, в том числе список тем, предлагаемых кафедрой:

Данный вид работы на занятии не предусмотрен.