Обнаружение альдегидоксидазы в молоке.

Оборудование: 1. глазные пипетки;

2. штатив с пробирками;

3. термостат.

Реактивы: 1. 0, 4% раствор формальдегида;

2. метиленовая синь;

3. растительное масло;

4. молоко.

Принцип метода. Альдегидоксидаза молока является флавопротеидом, способным окислять альдегиды. При добавлении к не кипяченому молоку формальдегида и метиленовой сини фермент окисляет альдегид в муравьиную кислоту, а освободившийся при этом водород передается на метиленовую синь, восстанавливая ее в бесцветное состояние. Реакцию используют, чтобы отличить кипяченое молоко от не кипяченого.

Ход работы. В 2 пробирки наливают по 15 капель молока. Молоко в одной из них кипятят на спиртовке, затем охлаждают. В обе пробирки вносят по 1-2 капли 0, 4% раствора формальдегида и по 1 капле раствора метиленовой сини. Содержимое пробирок перемешивают и добавляют несколько капель масла для создания анаэробных условий. Пробирки помещают в термостат при 37^ОС и отмечают постепенное обесцвечивание.

Вопросы к защите лабораторной работы:

1. Что такое дегидрогеназа?

2. Чем дегидрогеназы отличаются от оксидаз?

3. Приведите примеры известных вам дегидрогеназ и оксидаз.

4. Зачем в первом опыте использовали метиленовую синь и растительное масло?

5. С помощью какой биохимической реакции можно доказать свежесть молока?

6. К какому классу ферментов относится альдегидоксидаза? Какие реакции она катализирует?

7. Почему происходит обесцвечивание метиленовой сини?

8. Зачем пробирки с реакционной смесью помещают в термостат?

5.4. Итоговый контроль знаний:

- вопросы по теме занятия:

1. Что вы понимаете под термином «метаболизм»?

2. Охарактеризуйте две стороны метаболизма.

3. Что объединяет термин «биологическое окисление»?

4. Какие реакции окисления наиболее выгодны с энергетической точки зрения?

5. В каком виде выделяется и запасается энергия окислительно-восстановительных реакций?

6. Назовите отличия биологического окисления от окисления в неживой природе.

7. Дайте характеристику каждому этапу катаболизма.

8. Напишите в формулах окислительное декарбоксилирование пирувата. Расскажите о значении и регуляции этой реакции.

9. Напишите в формулах цикл Кребса.

10. Назовите субстраты и продукты цикла Кребса. Какова их дальнейшая судьба?

11. Какие витамины необходимы для работы ферментов цикла Кребса?

12. Назовите ключевые ферменты цикла Кребса и расскажите об их регуляции.

13. Где в клетке локализован цикл Кребса?

14. Каково значение цикла Кребса?

15. Что такое субстратное фосфорилирование? Укажите реакцию субстратного фосфорилирования в цикле Кребса.

- ситуационные задачи:

1. Напишите в формулах превращение цитрата в сукцинат. Назовите продукты этого превращения и их дальнейшую судьбу.

2. Что будет с циклом Кребса, если прекратится отток из него восстановленных эквивалентов (НАДН)? Ответ поясните.

3. К препарату митохондрий добавили пируват, меченный ¹⁴С по метильной группе. Какое положение займет ¹⁴С в оксалоацетате после одного оборота цикла Кребса?

ТЕСТОВЫЙ КОНТРОЛЬ КОНЕЧНОГО УРОВНЯ ЗНАНИЙ

1. ПОСЛЕДНИМ ЭТАПОМ КАТАБОЛИЗМА ЯВЛЯЕТСЯ

1) окисление глюкозы

2) окисление жирных кислот

3) окисление глицерина

4) переаминирование аланина

5) окисление пирувата и цикл Кребса

2. ПЕРВЫЙ ЭТАП КАТАБОЛИЗМА ЛОКАЛИЗОВАН В

1) митохондриях

2) микросомах

3) лизосомах

4) цитозоле

5) ЖКТ, лизосомах

3. НАИБОЛЬШУЮ ЭНЕРГИЮ ДЛЯ ЖИЗНЕДЕЯТЕЛЬНОСТИ КЛЕТКИ ДАЕТ

1) распад белков до аминокислот

2) распад углеводов до глюкозы

3) распад жира до глицерина и жирных кислот

4) работа дыхательной цепи в сопряженном режиме

5) работа дыхательной цепи в разобщенном режиме

4. ЭНЕРГЕТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ 3-ГО ЭТАПА КАТАБОЛИЗМА

1) 1%

2) 20%

3) 30%

4) 50%

5) 75-80%

5. БИОЛОГИЧЕСКОЕ ОКИСЛЕНИЕ – ЭТО

1) совокупность всех химических реакций организма

2) совокупность анаболических реакций

3) совокупность катаболических реакций

4) совокупность окислительно-восстановительных реакций

6. Домашнее задание для уяснения темы занятия (см. контрольные вопросы, тестовые задания и ситуационные задачи занятия №5).

7. Рекомендации по выполнению НИРС, в том числе список тем, предлагаемых кафедрой:

- разработать компьюторную обучающую программу по данной теме;

- подготовить презентацию данной темы. Для презентации рекомендуется использовать учебную и научную литературу, а также материалы сайтов Интернета. Приветствуются авторские разработки в виде схем, анимаций, видеороликов.

1. Занятие №5

Тема: « Дыхательная цепь.»

2. Форма организации занятия: лабораторное занятие.

3. Значение изучения темы: Тканевое дыхание тесно связано с дыханием организма в целом. Нарушение процессов тканевого дыхания приводит к гипоэнергетическим состояниям, которые являются причиной многих патологических состояний.

4. Цели обучения:

- общая:

Обучающийся должен обладать следующими общекультурными компетенциями (ОК): (ОК-1); (ОК-5).

Обучающийся должен обладать следующими профессиональными компетенциями (ПК): (ПК-2); (ПК-3); (ПК-4); (ПК-31).

- учебная:

знать:

- Компоненты дыхательной цепи.

- Ферменты дыхательной цепи.

- Механизм окислительного фосфорилирования.

- Свободное окисление.

- Возрастные и тканевые особенности энергетического обмена.

уметь:

- Рассчитывать энергетический выход при окислении определенных субстратов.

- Решать задачи с использованием изученного материала.

- Определять активность каталазы в слюне.

владеть:

- Навыками лабораторного дела.

5. План изучения темы:

5.1. Контроль исходного уровня знаний:

ТЕСТЫ ДЛЯ КОНТРОЛЯ ИСХОДНОГО УРОВНЯ ЗНАНИЙ

1. ПРИ ОКИСЛЕНИИ НАДН В ДЫХАТЕЛЬНОЙ ЦЕПИ ОБРАЗУЕТСЯ

1) 4 АТФ

2) 3 АТФ

3) 2 АТФ

4) 1 АТФ

2. СТИМУЛИРУЕТ РАБОТУ ДЫХАТЕЛЬНОЙ ЦЕПИ

1) АТФ

2) АДФ

3) инсулин

4) глюкагон

3. ЗНАЧЕНИЕ ДЫХАТЕЛЬНОЙ ЦЕПИ ЗАКЛЮЧАЕТСЯ

1) терморегуляция

2) синтез АТФ

3) синтез биологически важных соединений

4) обезвреживание ксенобиотиков

4. ФЕРМЕНТЫ И МЕТАБОЛИТЫ ЦИКЛА КРЕБСА НАХОДЯТСЯ

1) в матриксе митохондрий

2) во внутренней мембране митохондрий

3) в лизосомах

4) во внешней мембране митохондрий

5. ЦИКЛ КРЕБСА ПОСТАВЛЯЕТ В ДЫХАТЕЛЬНУЮ ЦЕПЬ

1) фосфорную кислоту

2) воду

3) восстановленные коферменты

4) кислород

Основные понятия и положения темы