Главная страница Случайная страница
КАТЕГОРИИ:
АвтомобилиАстрономияБиологияГеографияДом и садДругие языкиДругоеИнформатикаИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеталлургияМеханикаОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРелигияРиторикаСоциологияСпортСтроительствоТехнологияТуризмФизикаФилософияФинансыХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника
Определение креатинина в сыворотке крови и моче
|
|
| Оборудование: | 1. | Штатив с пробирками. |
| 2. | Пипетки на 1 мл и 5 мл. | |
| 3. | Мерная пробирка на 10 мл. | |
| 3. | КФК. | |
| 4. | Кюветы на 1 см. | |
| 5. | Центрифуга. | |
| 6. | Центрифужные пробирки. |
| Реактивы: | 1. | Трихлоруксусная кислота (ТХУ). |
| 2. | Пикриновая кислота. | |
| 3. | Едкий натр (NaOH). | |
| 4. | Стандартный раствор креатинина (177 мкмоль/л). | |
| 5. | Дистиллированная вода. | |
| 6. | Сыворотка. | |
| 7. | Моча, разведенная в 100 раз |
Принцип метода. В щелочной среде креатинин реагирует с пикриновой кислотой, образуя оранжево-красные соединения, интенсивность окраски которых определяют колориметрически.
Ход работы. В четыре пробирки смешать реактивы по схеме:
| № пробирки | ||||
| Отмерить, мл | Опытная сыв-ка | Опытная моча | Стандарт | Контроль |
| Сыворотка | 0, 5 | - | - | - |
| Разведенная моча | - | 0, 5 | - | - |
| Дист. вода | 1, 0 | 0, 25 | 0, 5 | 0, 75 |
| ТХУ | 0, 5 | 0, 25 | 0, 25 | 0, 25 |
| Стандартный р-р креатинина | - | - | 0, 25 | - |
| Реактивы (мл) | Опытная проба | Стандарт | Контроль |
| Сыворотка | 0, 5 | ---- | ---- |
| Дист. Вода | 1, 0 | 1, 0 | 1, 5 |
| ТХУ | 0, 5 | 0, 5 | 0, 5 |
| Стандартный р-р (конц. 177 мкмоль/л) | ---- | 0, 5 | ---- |
Через 5 минут содержимое пробирки №1 перенести в центрифужную пробирку и центрифугировать при 3000 об/мин в течение 5 минут. 1мл надосадочной жидкости внести в чистую пробирку (будет №1). В каждую пробу (пробирки № 1, 2, 3, 4) добавить по 0, 5 мл пикриновой кислоты и по 0, 5 мл едкого натра. Перемешать и оставить на 20 минут при комнатной температуре. Колориметрирование проводить против контрольной пробы при зеленом светофильтре в кюветах толщиной 0, 5см.
Расчет концентрации креатинина проводят по обычной формуле. Для мочи полученный результат умножают на 50 (коэффициент пересчета).
Содержание креатинина в суточной моче определяют по формуле:
С*1, 5/1000 = ммоль/сутки, где
С – концентрация креатинина в моче в мкмоль/л, 1, 5 – суточный диурез в литрах, 1000 – коэффициент перевода мкмоль в ммоль.
Норма креатинина в сыворотке крови – 53-106 мкмоль/л, в суточной моче – 4, 4-17, 6 ммоль/сутки.
Клиренс (коэффициент очищения) по креатинину рассчитывают по формуле:
(креатинин в моче/креатинин в крови)*1, 07, где
1, 07 – минутный диурез.
В норме клиренс по креатинину – 80-120 мл/мин.
Диагностическое значение определения креатинина:
Определение креатинина проводят для исследования функции почек. Содержание его в сыворотке крови увеличивается при значительном ухудшении функции почек. Креатининемия наблюдается также при закупорке мочевых путей, кишечной непроходимости, тяжелом диабете, механической желтухе, гиперфункции надпочечников, голодании. Увеличение креатинина в моче наблюдается при усиленной мышечной работе, лихорадочных состояниях, пневмонии, выраженной недостаточной функции печени.
Понижение креатинина в моче – при мышечной атрофии, голодании, дегенерации почек, лейкемии.
Расчет клиренса креатинина позволяет получить информацию об интенсивности основных функций нефронофильтрации, реабсорбции, секреции и почечном кровообращении.
Вопросы к защите лабораторной работы:
1. Принцип определения мочевины крови.
2. В каких случаях повышается концентрация мочевины в крови?
3. В каких случаях снижается концентрация мочевины в крови?
4. Какие ферменты синтеза мочевины могут быть использованы для диагностики патологий печени и почему?
5. Принцип метода определения креатинина в сыворотке крови.
6. Что такое клиренс и как он рассчитывается?
7. Почему расчет клиренса по кратинину является хорошим тестом фильтрационной способности почек?
8. Для диагностики каких заболеваний используется определение активности креатинкиназы и почему?
5.4. Итоговый контроль знаний:
- вопросы по теме занятия:
1. Назовите источники аммиака.
2. Почему аммиак токсичен?
3. Как аммиак обезвреживается в клетках?
4. Назовите транспортные формы аммиака в крови. Где и как они образуются?
5. Какие вещества необходимы для синтеза мочевины?
6. Где локализован синтез мочевины?
7. Сколько макроэргических связей необходимо расщепить для синтеза одной молекулы мочевины?
8. В каком виде поставляется аммиак в процесс синтеза мочевины?
9. Сколько молекул аммиака связано в одной молекуле мочевины?
10. Почему определение активности орнитинкарбамоилфосфаттрансферазы может служить диагностическим тестом при заболеваниях печени?
11. Какова взаимосвязь цикла Кребса и процесса синтеза мочевины?
12. Напишите схему синтеза креатина.
13. В каких тканях и во сколько стадий происходит синтез креатинфосфата?
14. Какое значение имеет креатинфосфат для жизнедеятельности организма?
15. При каких заболеваниях увеличивается активность креатинкиназы в крови?
16. Что такое креатинин?
17. Для диагностики каких заболеваний определяют содержание креатинина в крови и моче?
18. Дайте понятие о клиренсе.
19. Почему клиренс определяют по мочевине и креатинину?
20. Какое значение в организме имеет метионин?
21. Какое значение в организме имеет глицин?
- ситуационные задачи:
1. При исследовании мочи новорожденного обнаружена фенилпировиноградная кислота. О каком заболевании может идти речь? Возможен ли благоприятный исход при своевременном вмешательстве врача?
2. При обследовании больного обнаружено резкое увеличение отношения АсАТ/АлАТ. Какое заболевание у данного больного и активность какого фермента следует определить дополнительно для уточнения диагноза?
3. На аммиачном производстве произошла авария с розливом аммиака. Нескольких рабочих доставили в реанимацию в бессознательном состоянии. Объясните, почему рабочие потеряли сознание?
ТЕСТЫ ДЛЯ КОНТРОЛЯ КОНЕЧНОГО УРОВНЯ ЗНАНИЙ
1. ПРЯМЫМИ ПРЕДШЕСТВЕННИКАМИ АЗОТА МОЧЕВИНЫ ПРИ ЕЕ СИНТЕЗЕ В ОРНИТИНОВОМ ЦИКЛЕ ЯВЛЯЮТСЯ
1) аммиак
2) амидный азот глутамина
3) аминогруппа аспартата
4) аминогруппа орнитина
2. В НЕРАБОТАЮЩЕЙ МЫШЦЕ ЭНЕРГИЯ НАКАПЛИВАЕТСЯ В ФОРМЕ
1) жира
2) креатинфосфата
3) АТФ
4) сукцината
3. ДЛЯ СИНТЕЗА КРЕАТИНА ТРЕБУЮТСЯ
1) аланин
2) S-аденозилметионин
3) лейцин
4) глюкоза
4. В ПРОЦЕССЕ СИНТЕЗА МОЧЕВИНЫ ЭНЕРГИЯ АТФ ТРЕБУЕТСЯ В ОБРАЗОВАНИИ
1) аргинина
2) карбамоилфосфата
3) орнитина
4) фумарата
5.ОПРЕДЕЛЕНИЕ КЛИРЕНСА ПОЗВОЛЯЕТ СУДИТЬ О ФУНКЦИИ
1) почек
2) печени
3) мочевого пузыря
4) поджелудочной железы
6. Домашнее задание для уяснения темы занятия (см. контрольные вопросы, тестовые задания и ситуационные задачи занятия №16).
7. Рекомендации по выполнению НИРС, в том числе список тем, предлагаемых кафедрой:
Подготовить обучающую программу по циклу синтеза мочевины.