Культуральные и биохимические свойства бактерий коли-тифозной группы. Состав, значение, характер роста на средах пестрого ряда.

Посевы на пестрый ряд проводятся с целью изучения биохимической активности микробов с сахарами, белками и красителями. Наиболее часто используют " узкий" пестрый ряд:

1. Простое молоко;

2. Лакмусовое молоко;

3. Среда Гисса с лактозой;

4. Среда Гисса с глюкозой;

5. Бульон Штерна.

Простое молоко – обезжиренное, pH – 7, 2. Применяется для изучения протеологических ферментов.

Бактерии группы кишечная палочка свертывают молоко, а сальмонеллы не свертывают.

Лакмусовое молоко ▬ к обезжиренному молоку добавляют 5-10% лакмусовой настойки, молоко приобретает синевато-фиолетовую окраску. Применяется для изучения редуцирующих свойств.

Кишечная палочка образует кислоту, лакмусовое молоко становится розово-красным.

Сальмонеллы не вызывают изменения.

Среда Гисса с лактозой и глюкозой pH (7, 4) –Состав:

1. Вода дистиллированная – 100 мл;

2. Пептон 2 – 1 гр.;

3. Хлорид натрия – 0, 5 гр.;

4. Индикатор Андредэ – 1 гр.;

5. Глюкоза или лактоза – 1 гр.

Применяют эти среды для изучения способности микробов ферментировать глюкозу или лактозу.

Кишечная палочка – ферментирует глюкозу и лактозу с образованием кислоты и газа.

Сальмонеллы – ферментируют глюкозу с образованием кислоты и не ферментируют лактозу.

Среда Штерна применяется для дифференциации

сальмонелл и состоит из:

1. МПБ – 100 мл.;

2. Р-р фуксина основного – 5 капель;

3. 10% р-р сульфита натрия – 2 мл;

4. Глицерин – 2 мл;

5. 0, 25% р-р хризоидина – 1 мл.

Сальмонеллы S. typhimurium дают на среде покраснение. Кишечная палочка – среду не меняет.

Сальмонеллы - аэробы и факультативные анаэробы оптимальная температура роста 37⁰С, рН среды 7, 0-7, 2, однако они могут расти и при рН ниже 7, 0 до 8, 0 и выше. Хорошо растут на обычных питательных средах: МПА, МПБ, средах Эндо, Левина, Плоскирева, висмут-сульфитном агаре и др.

На мясопептонном агаре растут в виде полупросвечивающих, в большинстве случаев круглых колоний; на мясопептонном бульоне образуют равномерное помутнение; желатины не разжижают; индола не образуют; ферментируют глюкозу с образованием кислоты и не ферментируют лактозу.

Антигенная структура сальмонелл представлена соматическим или О-антигеном, жгутиковым или Н-антигеном.

Бактерии группы кишечная палочка (БГКП) являются аэробамиили факультативными анаэробами, оптимальная температура роста 37-38⁰С, рН среды 7, 0-7, 4. Хорошо растет на обычны питательных средах – МПА, МПБ, средах Эндо и Левина. На МПА через 24 ч появляются сочные, круглые, с ровными краями и гладкой поверхностью (S- форма) серо-белого цвета колонии. В МПБ – интенсивное помутнение среды и наличие незначительного осадка, легко разбивающегося при встряхивании

Бактерии группы кишечной палочки имеют сложное строение антигена. Они имеют три различных антигена О-(соматический), Н-(жгутиковый) и К-(капсульный). Среди всей этой группы встречаются патогенные серотипы, условно-патогенные и даже полезные для человека (ацидофильная, болгарская бактерии, актиномицеты и др.).

Биохимически кишечные палочки очень активны. Все они расщепляют лактозу, глюкозу, маннит, мальтозу, декстрозу, галактозу и ксилозу, разжижают желатин, редуцируют нитраты в нитриты, подавляющее большинство образуют индол, но не разлагают инозита и не образуют сероводород.

Бактерии группы протея также имеют различную антигенную структуру, которая положена в основу типизации и диагностики.

На основании ряда культурально-биохимических признаков описаны такие виды протея, как Proteus vulgaris, Proteus mirabilis и др. Эти бактерии обладают большой изменчивостью признаков, что затрудняет их классификацию. Наиболее постоянный признак для всех видов протея – способность разлагать мочевину.

Все условно-патогенные бактерии обладают относительно высокой устойчивостью. На объектах внешней среды сохраняются от 10 дней до 6 мес., устойчивы к высоким концентрациям поваренной соли и к высыханию, не погибают при минусовых температурах, жизнеспособны в холодной воде.

Быстро погибают при температуре +68° С и выше.

3.4. Исследование бактерий на подвижность.

Определение подвижности проводят методом " раздавленной" или " висячей капли".

Метод " раздавленной капли".

Готовится предметное стекло с луночкой, фломбируется, края лунки смазываются вазелином. На покровное стекло наносится капелька бульонной культуры, переворачивается на лунку так, чтобы не было соприкосновения с краями лунки (капля висит). Подогревается и микроскопируется.

Для контраста бульонную культуру предварительно окрашивают 1% раствором метиленового голубого.

3.5. Реакция агглютинации с монорецепторными сальмонеллезными, сыворотками.

Реакция основана на выделении О-(соматических) и Н-(жгутиковых) антигенов у отдельных видов сальмонелл при использовании монорецепторных сывороток.

В ветеринарной практике можно обнаружить главным образом бактерии рода сальмонелл пяти подгрупп: В, С1, С2, Д1, Е1.. Первоначально культуры испытывают в реакции агглютинации на предметном стекле с поливалентной сывороткой, с целью установления рода бактерий.

При отрицательной реакции дальнейшее исследование с О и Н агглютинирующими сыворотками не проводят.

При положительной реакции с поливалентной сывороткой приступают к их видовой дифференциации при помощи монорецепторных Если положительная реакция с одной из групповых сывороток указывает на принадлежность выделяемых культур к роду сальмонелл к той или иной серологической группе, то реакция агглютинации с монорецепторными сыворотками позволяет типизировать представителей этих бактерий до вида.

Техника постановки реакции агглютинации.

На предметное стекло наносят одну каплю неразведенной сыворотки. Платиновой петлей берут испытуемую 20 часовую агаровую культуру (для агглютинации с поливалентной и О сыворотками с верхней части агара, а для агглютинации Н сыворотками - из нижней).

Петлю с культурой постепенно смешивают с каплей и растирают на стекле.

" О " -агглютинация (образование комочков) наступает медленно.

" Н " -агглютинация наступает быстрее, агглютинат имеет вид крупных, легко разбивающихся хлопьев.

Агглютинат с поливалентной сывороткой имеет смешанный характер (хлопья, зерна). Реакция отрицательная – гомогенная взвесь.

Идентификацию сальмонеллезных культур проводят в следующем порядке. Сначала культуру испытывают в РА с одной из О сывороток, выбор которой основывается на виде животного, от которого выделена исходная культура и предполагаемого часто встречающегося серотипа.

При отрицательной реакции испытывают в РА с остальными четырьмя групповыми " О " -сыворотками.

При положительной реакции относят культуру к одной из подгрупп, Затем культуру испытывают в РА с Н -сыворотками первой и второй фазы. На основе положительной РА с определенными " О " - и " Н " -сыворотками испытуемую культуру относят к одному из серотипов.

3.6. Биологическая проба.

Цель биологической пробы – воспроизвести лабораторную модель болезни, выделить чистый возбудитель, определить его степень патогенности и подтвердить диагноз.

В качестве лабораторных животных используют белых мышей, морских свинок и кроликов.

Их заражают подкожно, внутрикожно, внутрибрюшинно, в мозг, внутривенно. Материалом для заражения служит суспензия из патологического материала.