Окраска капсул (метод Михина, Романовского-Гимза, Ольта, Бури-Гинсу).

Окраска капсул.

Тело микробной клетки покрыто рыхлым слизистым слоем. У некоторых видов микроорганизмов этот слой развивается очень сильно и тогда он называется капсулой. Капсула - муциноподобное вещество, высокомолекулярный полисахарид, является производным наружного слоя оболочки. Наличие капсулы является важным диагностическим признаком при идентификации и дифференциации возбудителей некоторых инфекций (сибирской язвы, пневмококковой пневмонии и др рис.2.)

Рис.2.Капсула у бактерий

а ‑ бацилла сибирской язвы; б - диплококк

Патогенные микроорганизмы образуют капсулу в инфицированном организме. Она является фактором вирулентности и защищает бактериальную клетку от фагоцитоза и бактерицидного действия сыворотки крови. Капсульное вещество плохо окрашивается. Поэтому при приготовлении препарата для обнаружения капсулы выполняют следующие правила:

а) мазок готовят из свежего материала, так как капсула быстро лизируется;

б) фиксируют мазок химическим способом, для окраски применяют метохромотические краски, то есть при использовании, которых цитоплазма окрашивается в один цвет, а капсула - в другой;

в) промывать мазок водой следует слабо и кратковременно.

Методы окраски: метод Михина, Бурри, Ионе, Николя, Ольта, Антони, окраска по Гису, по Гинсу.

Техника окраска капсул по методу Ольта. Свежий горячий 2%-ный раствор сафранина наносят на фиксированный мазок, окрашивают 5-7 минут. Быстро промывают водой и высушивают. Тело клетки окрашивается в краснокирпичный цвет, капсула в - желто-оранжевый.

Техника окрашивания капсулы методом Бурри-Гинсу:

1) Черная тушь (смешивается с культурой и высушивается)

2) Мазок фиксируется над пламенем спиртовки

3) Окраска водным раствором фуксина (Пфейффера – это разведение карболового фуксина Циля 1/10) время экспозиции 2-3 минут.

4) Промываем водой и высушиваем.

Бактерии красные. Фон черный. Капсулы неокрашенные -либо незначительно в красный цвет!