За методом Альтгаузена

ПРИНЦИП МЕТОДУ. Базується на тому, що сеча, яка містить цукор при кип’ятінні з лугом набуває різних відтінків коричневого кольору. Продуктами реакції є молочна кислота та гумінові речовини.

ХІД РОБОТИ

4-5 мл сечі змішують в пробірці з 1 мл 10% розчину їдкого натрію або калію; кип’ятять 1 хвилину і залишають на 10 хвилин в штативі. При наявності цукру в сечі в пробірці утворюється один з відтінків стандартної шкали Альтгаузена.

КЛІНІКО-ДІАГНОСТИЧНЕ ЗНАЧЕННЯ

Глюкозурія в сечі може спостерігатися при цукровому діабеті, гострих запальних процесах підшлункової залози, гіпертиреозі, акромегалії, синдромі Іценко-Кушінга, при захворюваннях печінки, внаслідок порушення синтезу глікогену, запальних процесах нирок, вагітності, надмірному вживанні вуглеводів з їжею.

Якісне визначення глюкози (реакції Тромера).

Реакція Тромера.

Принцип методу. Реакція грунтується на відновленні окисної міді у закисну.

Хід роботи. В пробірку наливають 1-2 мл сечі і доливають рівний об'єм їдкого натру. По краплях додають розчин мідного купоросу до появи незникаючої каламуті гідроокису міді. Обережно нагрівають верхню частину вмісту пробірки. Поява жовтого забарвлення гідрату міді, яке переходить в червоно-цеглянисте вказує на позитивну реакцію Тромера.

ЯКІСНА РЕАКЦІЯ НА АЦЕТОН І АЦЕТООЦТОВУ КИСЛОТУ
(ПРОБА ЛЕГАЛЯ)

ПРИНЦИП МЕТОДУ. Ацетон і ацетооцтова кислота в лужному середовищі з нітропрусидом натрію утворюють продукти реакції забарвлені в червоний колір. При додаванні концентрованої оцтової кислоти утворюється комплексна сіль вишнево-червоного забарвлення.

ХІД РОБОТИ

У пробірку наливають 0, 5 мл сечі, додають 0, 5 мл розчину їдкого натрію і 5-7 крапель нітропрусиду натрію. Спостерігають за появою червоного забарвлення. Підкислюють розчин декількома краплями концентрованої оцтової кислоти. Червоне забарвлення набуває вишневого відтінку.

КЛІНІКО – ДІАГНОСТИЧНЕ ЗНАЧЕННЯ

Кетонурія спостерігається при цукровому діабеті, дефіциті вуглеводів у харчуванні, перепродукції гормонів-антагоністів інсуліну (кортикостероїдів, тироксину, гормонів передньої долі гіпофізу та інших). Зниження кількості кетонових тіл не має клінічного значення. В ранньому дитячому віці тривалі розлади шлунково-кишкового тракту (токсикоз, дизентерія) можуть зумовити кетонемію в результаті хронічного голодування.

ЯКІСНА РЕАКЦІЯ НА КРОВ’ЯНІ ПІГМЕНТИ

(БЕНЗИДИНОВА ПРОБА)

ПРИНЦИП МЕТОДУ. Базується на окисленні бензидину атомарним киснем, який утворюється при розпаді перекису водню кров’яним пігментом – гемоглобіном, який має пероксидазну активність.

ХІД РОБОТИ

До 20 крапель сечі додають рівний об’єм розчину бензидину в оцтовій кислоті і декілька крапель перекису водню. При наявності кров’яних пігментів сеча забарвлюється в синьо-зелений колір.

КЛІНІКО – ДІАГНОСТИЧНЕ ЗНАЧЕННЯ

В разі появи в сечі крові (вірніше еритроцитів) говорять про гематурію, а при наявності кров’яних пігментів – про гемоглобінурію.

Сеча при гематурії непрозора, має червонуватий відтінок. Гематурія спостерігається при пораженні сечовивідних шляхів (сечові камені, рак сечового міхура, цистіт).

Гемоглобінурія спостерігається при отруєнні гемолітичними отрутами і при ряді захворювань, які пов’язані з гемолізом еритроцитів.

ЯКІСНІ РЕАКЦІЇ НА ЖОВЧНІ ПІГМЕНТИ

(УНІФІКОВАНА ПРОБА РОЗІНА)

ПРИНЦИП МЕТОДУ. Під дією йоду білірубін сечі окислюється в білівердин.

ХІД РОБОТИ

В пробірку наливають 4-5 мл сечі і обережно по стінках пробірки нашаровують розчин йоду. Поява на межі двох рідин зеленого кільця свідчить про наявність білірубіну.

КЛІНІКО-ДІАГНОСТИЧНЕ ЗНАЧЕННЯ

Поява жовчних пігментів в сечі може спостерігатися при механічному перешкодженні відтоку жовчі і ураженнях печінки (гепатити, цирози), гемолітичних станах та захворюваннях кишечника (ентерити, кишкова непрохідність, схильність до запорів). Білірубінурія спостерігається при паренхіматозній та обтураційній жовтяницях.

ЯКІСНА РЕАКЦІЯ НА ФЕНІЛПІРОВИНОГРАДНУ КИСЛОТУ

ПРИНЦИП МЕТОДУ. Фенілпіровиноградна кислота утворює з іонами трьохвалентного заліза комплексну сполуку забарвлену в синьо-зелений колір.

ХІД РОБОТИ

До 2 мл свіжовідфільтрованої сечі наливають 8-10 крапель 10% розчину FeCl₃. При наявності в сечі фенілпіровиноградної кислоти через 30-60 секунд з’являється синьо-зелене забарвлення, яке поступово блідне і вицвітає через 5-30 хвилин в залежності від концентрації фенілпіровиноградної кислоти в сечі.

Аналогічну пробу можна проводити на фільтрувальному папері і на дитячій пеленці: смужку фільтрувального паперу змочують сечею, висушують на повітрі і наносять краплю 10% розчину FeCl₃. Позитивна проба дає синьо-зелене забарвлення. Аналогічну пробу проробляють з сухою або мокрою пеленкою.

КЛІНІКО – ДІАГНОСТИЧНЕ ЗНАЧЕННЯ

Вроджена відсутність у дітей в печінці ферменту 4- фенілаланінгідроксилази приводить до того, що фенілаланін не гідроксилюється і не перетворюється в тирозин.

Накопичення фенілаланіну та продукту його розпаду фенілпіровиноградної кислоти в крові і тканинах зумовлює інтоксикацію та порушення нормального розвитку мозку і появи тяжких розладів психіки дитини. Доказом цього спадкового захворювання – фенілпіровиноградної олігофренії є виявлення підвищеного вмісту фенілаланіну в крові і наявність фенілпіровиноградної кислоти в сечі.

Література

1. Гонський Я.І., Максимчук Т.П. Біохімія людини. Тернопіль: Укрмедкнига, 2001. – 736с.
2. Губський Ю.І. Біологічна хімія. – Київ-Тернопіль: Укрмедкнига, 2000. – 508с.
3. Гонський Я.І., Максимчук Т.П., Калинський М.І. Біохімія людини. Підручник. – Тернопіль: Укрмедкнига, 2002. – 744с.

4.Скляров О.Я. Клінічна біохімія. – Київ: Здоров`я, 453с.

Обговорено і затверджено на засіданні кафедри, протокол №1 від 28.08.2008р.

Зав. кафедрою проф. Ерстенюк А.М.

1. Якісна реакція на білок (із сульфосаліциловою кислотою).

Осадження концентрованими кислотами.

Принцип методу. При дії на білок концентрованих мінеральних і органічних кислот відбувається денатурація білка внаслідок дегідратації та утворення комплексних сполук. В більшості мінеральних кислот осад денатурованого білка може розчинитися при надлишку кислоти, хоча білок не повертається до нативного стану. Тільки в присутності азотної, сульфосаліцилової та трихлороцтової кислот утворюється стійкий осад і це застосовується в медичній практиці для визначення вмісту білка в біологічних рідинах.

Хід роботи. В чотири пробірки наливають по 1 мл кислот: в першу - концентрованої азотної кислоти; в другу - концентрованої сірчаної кислоти; третю - 10% розчину трихлороцтової кислоти, четверту - 2% розчину сульфосаліцилової кислоти. Обережно по стінці в кожну пробірку наливають рівний об’єм розчину білка. При додаванні надлишку азотної, трихлороцтової і сульфосаліцилової кислот осад не розчиняється, а при додаванні надлишку сірчаної кислоти осад розчиняється.

2. Якісне визначення глюкози (реакції Тромера, Фелінга).

Реакція Тромера.

Принцип методу. Реакція грунтується на відновленні окисної міді у закисну.

Хід роботи. В пробірку наливають 1-2 мл сечі і доливають рівний об'єм їдкого натру. По краплях додають розчин мідного купоросу до появи незникаючої каламуті гідроокису міді. Обережно нагрівають верхню частину вмісту пробірки. Поява жовтого забарвлення гідрату міді, яке переходить в червоно-цеглянисте 9 вказує на позитивну реакцію Тромера.

Реакція Фелінга.

Принцип методу. З реактивом Фелінга такий самий, як і при реакції Тромера. Перевагою реакції Фелінга є те, що мідь при надлишку реактиву не утворює окису міді. Реакція зупиняється на стадії утворення закису міді червоного кольрору, що дозволяє чітко визначити кінець реакції.

Хід роботи. До 1-2 мл сечі додають рівний об'єм реактива Фелінга та нагрівають. У випадку наявності глюкози в сечі спостерігають утворення осаду червоно-цеглянистого кольору закису міді.

3. Кількісне визначення глюкози (за методом Альтгаузена).

Принцип методу. Метод базується на тому, що сеча, яка містить цукор при кип’ятінні з лугом набуває різних відтінків коричневого кольору (від жовтого до темно-бурого). Продуктами реакції є молочна кислота та гумінові речовини.

Хід роботи. 4-5 мл сечі змішують в пробірці з 1мл 10% їдкого натрію або калію; кип’ятять 1 хвилину і залишають на 10 хвилин в штативі. При наявності цукру в сечі в пробірці утворюється один з відтінків стандартної шкали Альтгаузена.