цКЮБМЮЪ ЯРПЮМХЖЮ яКСВЮИМЮЪ ЯРПЮМХЖЮ
йюрецнпхх:
юБРНЛНАХКХюЯРПНМНЛХЪаХНКНЦХЪцЕНЦПЮТХЪдНЛ Х ЯЮДдПСЦХЕ ЪГШЙХдПСЦНЕхМТНПЛЮРХЙЮхЯРНПХЪйСКЭРСПЮкХРЕПЮРСПЮкНЦХЙЮлЮРЕЛЮРХЙЮлЕДХЖХМЮлЕРЮККСПЦХЪлЕУЮМХЙЮнАПЮГНБЮМХЕнУПЮМЮ РПСДЮоЕДЮЦНЦХЙЮоНКХРХЙЮоПЮБНоЯХУНКНЦХЪпЕКХЦХЪпХРНПХЙЮяНЖХНКНЦХЪяОНПРяРПНХРЕКЭЯРБНрЕУМНКНЦХЪрСПХГЛтХГХЙЮтХКНЯНТХЪтХМЮМЯШуХЛХЪвЕПВЕМХЕщЙНКНЦХЪщЙНМНЛХЙЮщКЕЙРПНМХЙЮ
дРУГИЕ СПОСОБЫ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РАСПРЕДЕЛЕНИЯ РЕЦЕПТОРОВ АХ
|
|
Другой способ для определения того, каким образом рецепторы АХ распределены по поверхности мышечного волокна, основан на связывании a-бунгаротоксина — токсина, содержащегося в змеином яде и связывающегося избирательно и необратимо с никотиновыми АХ рецепторами. Распределение связывания токсина можно наблюдать с использованием гистохимических методик. Например, флуоресцентные метки могут быть связаны с a-бунгаротоксином, и распределение рецепторов может быть исследовано с помощью флуоресцентного микроскопа 43) (рис. 9.10А). a-Бунгаротоксин может быть также связан с ферментом пероксидазой хрена, и плотный продукт реакции визуализован в электронном микроскопе 44) (рис. 9.10В). Эти эксперименты подтверждают, что рецепторы сконцентрированы непосредственно под окончанием аксона. Еще более точная количественная оценка концентрации АХ рецепторов может быть получена с использованием радиоактивного a-бунгаротоксина и авторадиографии (рис.9.10С) 45). Плотность рецепторов может быть определена путем подсчета количества гранул серебра в экспонированной эмульсии. Плотность рецепторов наибольшая на перегибах и верхней трети постсинаптических складок (около 104/мкм2); в экстрасинаптических участках плотность значительно меньше (около 5/мкм2) 46). Рецепторы сконцентрированы на постсинаптической мембране также в синапсах центральной и периферической нервной системы.
Нейромедиаторы и другие вещества могут подаваться на нейроны и мышечные волокна также толчками давления, подаваемыми на кончик пипетки. Преимуществом этого метода является то, что им можно подавать
176 Раздел II. Передача информации в нервной системе
| Рис. 9.9. Распределения АХ-рецепторов в нервно-мышечном соединении змеи. (А) Удаление нервного окончания с поверхности мышечного волокна после обработки коллагеназой. (В) Постсинаптическая мембрана после удаления нервного окончания. Заполненная АХ пипетка (справа) нацелена на один из кратеров, в котором до этого находился пресинаптический бутон. (С) Рисунок области, обозначенной скобками на части (В), с изображением четырех кратеров, в которых раньше находились пресинаптические бутоны. Центральная часть кратера, обозначенная более темным цветом, является постсинаптической мембраной, вокруг нее (светлым) — края кратера, за которыми ниже находится экстрасинаптическая область, обозначенная переходным (между темным и светлым) серым цветом. (D) Распределение чувствительности к АХ. Кратеры имеют самую высокую чувствительность к АХ (5000 мВ/нК); на краях кратеров чувствительность постепенно снижается и в экс трасинаптической области составляет всего около 100 мВ/нК. Fig. 9.9. Acetylcholme Receptor Distribution at the skeletal neuromuscular junction of the snake. | 
(A) Light micrograph showing the removal of the nerve terminal from the neuromuscular junction in a muscle treated with coliagenase. (B) Light micrograph of the postsynaptic surface of the muscle cell exposed by removal of the nerve terminal. An ACh-filled pipette (entering from upper right; compare with part C) points to a crater that had been occupied by a terminal bouton. (С) Drawing of the area bracketed in B, showing the position of four craters formerly occupied by terminal boutons. Dark areas represent postsynaptic membrane within the craters, light areas are the crater rims, and grey areas are extrasynaptic regions. (D) Distribution of ACh sensitivity. The craters have a uniformly high sensitivity to ACh (5 000 mV/nC); the sensitivity declines steeply at the rims of the craters; extrasynaptic regions have a uniformly low ACh sensitivity (100 mV/nC). (After Kuffter and Yoshikami, 1975.)
|
электрически нейтральные молекулы. Вещества могут также подаваться на клетки или участки мембран с использованием методики очень быстрой замены растворов заданного состава 47).