Принципы микробиологической диагностики дифтерии.

Бактериоскопический метод - окраска по Граму неспецифична, но позволяет косвенно идентифицировать непатогенные коринебактерии, располагающиеся в виде палисада (параллельно) или в виде китайских иероглифов. Окраска по Нейссеру выявляет характерные зёрна Бабеша-Эрнста и позволяет отдифференцировать Corynebacterium diphtheriae от Corynebacterium pseudodiphtheriticum (С. hofmannii), однако к результатам следует относиться с определённой осторожностью, т.к. в мазках могут присутствовать и другие зернистые бактерии (например, стрептобациллы). В текущих исследованиях обычно ограничиваются бактериоскопией мазков и обнаружением микроорганизмов, аналогичных по морфологии и тинкториальным свойствам С. diphtheriae, чего вполне достаточно для подтверждения клинического диагноза.

Естественным методом микробиологической диагностики дифтерии является бактериологический, с обязательной проверкой выделенной культуры коринебактерий на токсигенность. Бактериологическое исследование на дифтерию проводят в 3 случаях:

§ для диагностики дифтерии у детей и взрослых с острыми воспалительными процессами в области носа, зева, носоглотки;

§ по эпидемическим показаниям лиц, находившихся в контакте с источником возбудителя инфекции;

§ лиц, вновь поступающих в детские дома, ясли, школы-интернаты, другие специальные учреждения для детей и взрослых, с целью выявления среди них возможных бактерионосителей дифтерийной палочки.

Материалом для исследования служат слизь из зева и носа, пленка с миндалин иди других слизистых оболочек, являющихся местом входных ворот возбудителя.

Посевы производят на теллуритовые сывороточные или кровяные среды и одновременно на свернутые сывороточные среды Ру (свернутая лошадиная сыворотка) и Леффлера (3 части бычьей сыворотки + 1 часть сахарного бульона), на которых рост коринебактерий появляется уже через 8-12 ч. Выделенную культуру идентифицируют по совокупности морфологических, культуральных и биохимических свойств, по возможности используют методы серо- и фаготипирования. Во всех случаях обязательна проверка на токсигенность одним из указанных выше методов. Морфологические особенности лучше изучать, используя 3 метода окрашивания препарат-мазка: по Граму, Нейссеру и метиленовым синим.

Также используется ПЦР – полимеразная цепная реакция на готовых дисках – поиск токсигена,

РП – реакция преципитации – идет в геле.

Скрининговые реакции – диагностикум эритроцитарный дифтерийный антигенный жидкий.