Общие сведения. Исследование на менингококковую инфекцию проводится одновременно с поиском других возможных возбудителей бактериальных менингитов (пневмококков

⇐ ПредыдущаяСтр 29 из 37Следующая ⇒

Исследование на менингококковую инфекцию проводится одновременно с поиском других возможных возбудителей бактериальных менингитов (пневмококков, гемофильных бактерий и др.). Поэтому здесь представлены основные дифференциально-диагностические признаки и методы выделения этих возбудителей. По классификационной системе определителя Берги менингококк Neisseria meningitidis принадлежит к семейству Neisseriaceae, роду Neisseria. Род нейссерий включает два вида патогенных микроорганизмов: менингококк и гонококк, остальные представители рода являются резидентной флорой слизистых оболочек - N. sicca, N. subflava, N. flavescens, N. mucosa.

Менингококки очень требовательны к условиям культивирования: не растут на простых питательных средах, требуют сред, богатых аминокислотами, растут на простых питательных средах, содержащих дополнительно нативную сыворотку крови. При росте требуют повышенной влажности и 5-10-процентного содержания СО2, в воздухе. Питательные среды должны быть свежеприготовленными с содержанием агар-агара в них в пределах 1, 2—1, 5 % (при применении порошковидного агар-агара). В качестве источника нативной сыворотки рекомендуется применять сыворотку крупного рогатого скота, лошадиную сыворотку или кровь животного. Для инактивации комплемента и ферментов сыворотки ее следует прогревать при температуре 56 °С в течение 30 мин.

Оптимальные и наиболее доступные практике варианты рецептов питательных сред даны в приложении 1.

При приготовлении сред рекомендуется использовать бульоны из рыбного гидролизата, сухого питательного бульона, тиамин-цистин-глутаминовый агар, эритрит агар. Менингококки очень чувствительны к малейшим отклонениям температуры, поэтому все посевы следует производить только после предварительного подогрева питательной среды в термостате при температуре 37°С. Посевы можно извлекать из термостата не более чем на 30 мин. Идентификация вида N. meningitidis основана на комплексе морфологических, тинкториальных и культуральных признаков (см. таблицу 8). Менингококки представляют собой неподвижные кокки, располагающиеся попарно, иногда образуют тетрады и кучки. В материале, полученном из инфицированного организма (спинномозговая жидкость, кровь), бактерии бобовидной формы окружены нежными капсулами, которые выявляются в виде слабо окрашенного ореола вокруг клетки, расположены внутриклеточно. В культурах, выращенных на искусственных питательных средах, эти признаки утрачиваются, ореол исчезает. При первичном выделении клеткам менингококков свойствен полиморфизм, который может утрачиваться при субкультивировании.

Нейссерии — грамотрицательные бактерии, но отношение к окраске по Граму выражено у них недостаточно четко. Поэтому рекомендуется проводить окрашивание по Граму в модификации Калины (см. приложение 2).

Менингококки не образуют пигмента. Колонии менингококков на сывороточном агаре бесцветны, их диаметр от 1, 5 до 2 мм. Пигментообразующие нейссерии иногда через 24 ч еще не формируют пигмента, он накапливается в 48-72-часовых культурах.

Колонии многих непатогенных нейссерии крошатся или тянутся под петлей, что отличает их от колоний менингококков.

Таблица 8

Культуральные и биохимические свойства нейссерий и M. сatarrhalis

Рост Сахаролитические свойства

Возбудители на сывороточном агаре 37 °С на бес-сывороточном агаре 37 °С на сывороточном агаре 20-22 °С на 5% желчном агаре с сывороткой 37 °С Зависимость роста от CO2 при первичном выделении Образование пгмента Глюкоза Мальтоза Сахароза Фруктоза (левулеза) Лактоза Образование полисахарида на агаре с 5 % сахарозы

N. meningitidis + - - - + - К К - - - -

N. gonorrhoeae + - - - + - K - - - - -

N. subflava + +/- +/- + - + К К - - - -

N. perflava + - +/- + - + К К K K - +

N. flava + +/- +/- + - + К К - K - -

N. sicca + +/- +/- +/- - +/- К К K K - +

N. lactamica + + + + - + K K - - K -

N. f lavesсens + + +/- + - + - - - - +

N. mucosa + + +/- + - - К К К К - +

M. catarrhalis + + + - - - - - - - - -

Условные обозначения: + положительный тест; - отрицательный тест; К — образование кислоты.

Для дифференциации N. meningitidis от непатогенных нейссерии и Moraxella сatarrhalis рекомендуется использовать культуральные признаки, характерные для первых генераций микроба.

Как дополнительный тест при дифференциации непатогенных нейссерий применяют тест редукции нитратов/нитритов (таблица 9).

Таблица 9

Тест редукции нитратов/нитритов

Микроорганизмы Редукция

Нитратов Нитритов

N. meningitidis - -

N. gonorrhoeae - ±

N. subflava - +

N. perflava - +

N. flava - +

N. sicca - +

N. lactamica + +

N. f lavesсens - +

N. mucosa + +

M. catarrhalis - +

При первичном выделении менингококк не способен расти на бессывороточном агаре при температуре 37 °С. В отличие от непатогенных нейссерий менингококки не растут на питательных средах с 5 % желчи. Менингококки не растут на сывороточном агаре при температуре 20-22°С (но не при комнатной температуре). Некоторые штаммы непатогенных нейссерии при первичном выделении также не растут в этих условиях. Поэтому указанный признак не имеет абсолютного дифференциального значения.

Среди биохимических свойств важным дифференциальным признаком, особенно для штаммов менингококков, выделенных из носоглотки, является ферментация глюкозы и мальтозы до образования кислоты. Некоторые штаммы менингококков при первичном выделении из ликвора обладают замедленной ферментативной активностью и разлагают эти углеводы на вторые - третьи сутки. Большинство непатогенных видов нейссерий, в отличие от менингококка, способны при выращивании на сывороточном агаре с 5 % сахарозой образовывать крахмалоподобное вещество (полисахарид), которое выявляется с помощью водного раствора Люголя, нанесенного на поверхность выросшей культуры. Положительная реакция характеризуется появлением бурого окрашивания культуры. Наличие оксидазы и каталазы — признаки, которые не существенны при дифференциации менингококков. Эти свойства присущи всем нейссериям и Moraxella catarrhalis. Однако по ним возможно осуществлять дифференциацию нейссерий, гемофилов, пневмококков (см. таблицу 10 и приложение 3).

Таблица 10

Тесты для определения родовой принадлежности выделенных микроорганизмов

Микроорганизмы Морфология Окраска по Граму Реакция на оксидазу Реакция на каталазу

Гемофилы Нейссерии Пневмококки Палочки Кокки Кокки - - + - + - + + -

Серологическое группирование менингококков рекомендуется проводить после окончательной видовой идентификации возбудителя, что обусловлено общими антигенными факторами менингококков с непатогенными нейссериями (см. приложение 4). Этот метод является обязательным, позволяющим проводить эпидемиологический надзор за менингококковой инфекцией.

Менингококки делятся на несколько серологических групп (см. раздел 1.1). Штаммы, выделенные из носоглоточной слизи, в половине случаев не поддаются группированию в реакции агглютинации по причине полиагглютинабельности или аутоагглютинации. Проведение серологического группирования менингококков является обязательным для практических лабораторий, как одна из мер эпидемиологического надзора за менингококковой инфекцией.

Следует отметить, что многократные пересевы менингококков и длительное хранение их способствует утрате ими основных дифференциально-диагностических признаков: они приобретают способность к росту на бессывороточных средах и при температуре 20°С, усиливается сахаролитическая активность менингококков, изменяется их антигенная структура, теряется способность агглютинироваться специфическими сыворотками. Поэтому для изучения основных биологических признаков пригодны только свежевыделенные штаммы (не более третьей — четвертой генерации). Для определения биохимических признаков можно использовать коммерческие тест-системы.

⇐ Предыдущая 24 25 26 27 282930 31 32 33 Следующая ⇒

Поделиться с друзьями:

mylektsii.su - Мои Лекции - 2015-2024 год. (0.008 сек.)Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав Пожаловаться на материал