Студопедия

Главная страница Случайная страница

КАТЕГОРИИ:

АвтомобилиАстрономияБиологияГеографияДом и садДругие языкиДругоеИнформатикаИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеталлургияМеханикаОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРелигияРиторикаСоциологияСпортСтроительствоТехнологияТуризмФизикаФилософияФинансыХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника






Общие сведения. Исследование на менингококковую инфекцию проводится одновре­менно с поиском других возможных возбудителей бактериальных менин­гитов (пневмококков






 

Исследование на менингококковую инфекцию проводится одновре­менно с поиском других возможных возбудителей бактериальных менин­гитов (пневмококков, гемофильных бактерий и др.). Поэтому здесь пред­ставлены основные дифференциально-диагностические признаки и мето­ды выделения этих возбудителей. По классификационной системе опре­делителя Берги менингококк Neisseria meningitidis принадлежит к се­мейству Neisseriaceae, роду Neisseria. Род нейссерий включает два вида патогенных микроорганизмов: менингококк и гонококк, остальные пред­ставители рода являются резидентной флорой слизистых оболочек - N. sicca, N. subflava, N. flavescens, N. mucosa.

Менингококки очень требовательны к условиям культивирования: не растут на простых питательных средах, требуют сред, богатых аминокислотами, растут на простых питательных средах, содержащих дополнительно нативную сыворотку крови. При росте требуют повышенной влажности и 5-10-процентного содержания СО2, в воздухе. Питательные среды должны быть свежеприготовленными с содержанием агар-агара в них в пределах 1, 2—1, 5 % (при применении порошковидного агар-ага­ра). В качестве источника нативной сыворотки рекомендуется применять сыворотку крупного рогатого скота, лошадиную сыворотку или кровь жи­вотного. Для инактивации комплемента и ферментов сыворотки ее следу­ет прогревать при температуре 56 °С в течение 30 мин.

Оптимальные и наиболее доступные практике варианты рецептов пи­тательных сред даны в приложении 1.

При приготовлении сред рекомендуется использовать бульоны из рыбного гидролизата, сухого питательного бульона, тиамин-цистин-глутаминовый агар, эритрит агар. Менингококки очень чувствительны к малейшим отклонениям темпе­ратуры, поэтому все посевы следует производить только после предвари­тельного подогрева питательной среды в термостате при температуре 37°С. Посевы можно извлекать из термостата не более чем на 30 мин. Идентификация вида N. meningitidis основана на комплексе морфо­логических, тинкториальных и культуральных признаков (см. таблицу 8). Менингококки представляют собой неподвижные кокки, располага­ющиеся попарно, иногда образуют тетрады и кучки. В материале, полу­ченном из инфицированного организма (спинномозговая жидкость, кровь), бактерии бобовидной формы окружены нежными капсулами, которые выявляются в виде слабо окрашенного ореола вокруг клетки, расположены внутриклеточно. В культурах, выращенных на искусствен­ных питательных средах, эти признаки утрачиваются, ореол исчезает. При первичном выделении клеткам менингококков свойствен полимор­физм, который может утрачиваться при субкультивировании.

Нейссерии — грамотрицательные бактерии, но отношение к окраске по Граму выражено у них недостаточно четко. Поэтому рекомендуется проводить окрашивание по Граму в модификации Калины (см. приложение 2).

Менингококки не образуют пигмента. Колонии менингококков на сы­вороточном агаре бесцветны, их диаметр от 1, 5 до 2 мм. Пигментообразующие нейссерии иногда через 24 ч еще не формируют пигмента, он накапливается в 48-72-часовых культурах.

Колонии многих непатогенных нейссерии крошатся или тянутся под петлей, что отличает их от колоний менингококков.

Таблица 8

Культуральные и биохимические свойства нейссерий и M. сatarrhalis

  Рост     Сахаролитические свойства  
Возбудители на сыво­роточном агаре 37 °С на бес-сывороточном агаре 37 °С на сывороточном агаре 20-22 °С на 5% желчном агаре с сывороткой 37 °С Зависимость роста от CO2 при первичном выделении Образо­вание пгмента Глю­коза Маль­тоза Саха­роза Фрук­тоза (левулеза) Лак­тоза Образование полисахарида на агаре с 5 % сахарозы
N. meningitidis + - - - + - К К - - - -
N. gonorrhoeae + - - - + - K - - - - -
N. subflava + +/- +/- + - + К К - - - -
N. perflava + - +/- + - + К К K K - +
N. flava + +/- +/- + - + К К - K - -
N. sicca + +/- +/- +/- - +/- К К K K - +
N. lactamica + + + + - + K K - - K -
N. f lavesсens + + +/- + - + - - - -   +
N. mucosa + + +/- + - - К К К К - +
M. catarrhalis + + + - - - - - - - - -

 

 

Условные обозначения: + положительный тест; - отрицательный тест; К — об­разование кислоты.

Для дифференциации N. meningitidis от непатогенных нейссерии и Moraxella сatarrhalis рекомендуется использовать культуральные признаки, характерные для первых генераций микроба.

Как дополнительный тест при дифференциации непатогенных нейссерий применяют тест редукции нитратов/нитритов (таблица 9).

 

Таблица 9

Тест редукции нитратов/нитритов

 

  Микроорганизмы   Редукция
Нитратов Нитритов
N. meningitidis - -
N. gonorrhoeae - ±
N. subflava - +
N. perflava - +
N. flava - +
N. sicca - +
N. lactamica + +
N. f lavesсens - +
N. mucosa + +
M. catarrhalis - +

 

При первичном выделении менингококк не способен расти на бессы­вороточном агаре при температуре 37 °С. В отличие от непатогенных нейссерий менингококки не растут на питательных средах с 5 % желчи. Менингококки не растут на сывороточном агаре при температуре 20-22°С (но не при комнатной температуре). Некоторые штаммы непа­тогенных нейссерии при первичном выделении также не растут в этих условиях. Поэтому указанный признак не имеет абсолютного дифферен­циального значения.

Среди биохимических свойств важным дифференциальным призна­ком, особенно для штаммов менингококков, выделенных из носоглотки, является ферментация глюкозы и мальтозы до образования кислоты. Некоторые штаммы менингококков при первичном выделении из ликвора обладают замедленной ферментативной активностью и разлагают эти углеводы на вторые - третьи сутки. Большинство непатогенных видов нейссерий, в отличие от менингококка, способны при выращивании на сывороточном агаре с 5 % сахарозой образовывать крахмалоподобное вещество (полисахарид), которое выявляется с помощью водного раство­ра Люголя, нанесенного на поверхность выросшей культуры. Положительная реакция характеризуется появлением бурого окрашивания куль­туры. Наличие оксидазы и каталазы — признаки, которые не существен­ны при дифференциации менингококков. Эти свойства присущи всем нейссериям и Moraxella catarrhalis. Однако по ним возможно осуществлять дифференциацию нейссерий, гемофилов, пневмококков (см. таблицу 10 и приложение 3).

 

Таблица 10

Тесты для определения родовой принадлежности выделенных микроорганизмов

 

Микроорганизмы Морфология Окраска по Граму Реакция на оксидазу Реакция на каталазу
Гемофилы Нейссерии Пневмококки Палочки Кокки Кокки - - + - + - + + -

 

 

Серологическое группирование менингококков рекомендуется проводить после окончательной видовой идентификации возбудителя, что обусловлено общими антигенными факторами менингококков с непато­генными нейссериями (см. приложение 4). Этот метод является обязательным, позволяющим проводить эпидемиологический надзор за менингококковой инфекцией.

Менингококки делятся на несколько серологических групп (см. раздел 1.1). Штаммы, выделенные из носоглоточной слизи, в половине случаев не поддаются группированию в реакции агглютина­ции по причине полиагглютинабельности или аутоагглютинации. Прове­дение серологического группирования менингококков является обязате­льным для практических лабораторий, как одна из мер эпидемиологичес­кого надзора за менингококковой инфекцией.

Следует отметить, что многократные пересевы менингококков и дли­тельное хранение их способствует утрате ими основных дифференциаль­но-диагностических признаков: они приобретают способность к росту на бессывороточных средах и при температуре 20°С, усиливается сахаролитическая активность менингококков, изменяется их антигенная структу­ра, теряется способность агглютинироваться специфическими сыворот­ками. Поэтому для изучения основных биологических признаков пригод­ны только свежевыделенные штаммы (не более третьей — четвертой гене­рации). Для определения биохимических признаков можно использовать коммерческие тест-системы.

 


Поделиться с друзьями:

mylektsii.su - Мои Лекции - 2015-2024 год. (0.008 сек.)Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав Пожаловаться на материал