Бактериологическое исследование носоглоточной слизи на менингококки

Первый день исследования.

Исследуемый материал слизь с задней стенки носоглотки - берут натощак или через 3-4 ч после еды стериль­ным ватным тампоном. Тампон вводят изогнутым концом кверху под язы­чок мягкого неба, фиксируя стерильным шпателем корень языка. Мазок берут с задней стенки глотки, не касаясь зубов, языка и слизистой щек (см.приложение 7).

Лучшие результаты дает непосредственный посев материала на чаш­ки с питательной средой (сывороточный агар, тиамин-цистин-глутаминовый агар и эритрит-агар с добавлением сыворотки). Для подавления роста грамположительных кокков в среды добавляют линкомицин -5 мкг/мл или ристомицин — 20 ЕД/мл среды. Использование питательной среды с ристомицином в указанной концентрации не исключает одновремен­ный посев материала на сывороточную среду без ристомицина. На одну чашку можно засеять две пробы. При посеве на питательную среду с линкомицином одновременно в обязательном порядке засевают на сыво­роточную среду без линкомицина.

Для того чтобы посев не был слишком густым, рекомендуется сделать площадку тампоном величиной 10-15мм в верхней части засеваемого сектора — сначала на чашке с антибиотиком, а затем на чашке без ингибитора. После этого углом стеклянного шпателя или петлей рассевают материал штрихами.

Можно использовать увлажненные тампоны или тампоны с транс­портной средой. В качестве транспортной среды используют 0, 1% полужидкий агар, среду 199, среду Игла, коммерческие среды, предназначенные для сохранения культур (транспортная среда Эймса - Amies Transport Medium).

Для пересылки материала (засеянные чашки, увлажненные тампо­ны, тампоны в транспортных средах) обязательно применять термо­изоляционные контейнеры или любую другую упаковку, где поддерживается температура 37 °С. Тампоны в 0, 1% полужид­ком агаре помещают в термостат для подращивания флоры. Смоченные тампоны или тампоны в транспортной бульонной среде засеваем на чашку с сывороточным агаром, лишенным ингибитора, без предварительного подращивания (см. приложение 3). Посев тампоном делают в описанном выше порядке. Засеянные чашки помещают в термостат.

Второй день исследования.

Просматривают чашки, засеянные накану­не, визуально и под лупой-микроскопом. Подозрительные колонии отсевают на секторы чашки с сывороточным агаром (не менее трех-пяти колоний). На средах с ингибиторами вырастают преимущественно только грамотрицательные бактерии, обычно представители рода нейссерий. При отсутствии роста в чашках с антибиотиками проводят повторный просмотр их через 40-48 ч после посева.

Колонии менингококков и M. сatarrhalis бесцветны. Колонии пигментообразующих нейссерий дифференцируются благодаря желтоватой ок­раске. Пигмент может быть слабо выражен и выявляется при последую­щем субкультивировании на увлажненной среде.

В это же время делают высев из полужидкой (0, 1 %) транспортной среды на чашку с сывороточным агаром без ингибитора.

Третий день исследования.

Проводят микроскопирование чистой куль­туры, выросшей на сывороточном агаре. В первых генерациях для менин­гококков характерен полиморфизм и вариабельность окраски, что не наб­людается у непатогенных нейссерий. Культуры, колонии которых имеют желтый пигмент различной интен­сивности, а также характеризующиеся «сухим» ростом, отбрасывают. Следует иметь в виду, что на сывороточном агаре колонии менинго­кокков могут выглядеть желтоватыми из-за оттенка среды. Поэтому для обнаружения пигмента их необходимо просматривать при дневном осве­щении. О пигментообразовании можно судить и по цвету культуры, сня­той со среды бактериологической петлей.

Для дальнейшего исследования на менингококк оставляют только непигментированные культуры, дающие нежный влажный рост. Из них готовят мазки, окрашенные по Граму в модификации Калины. После микроскопии из этих культур делают посев на сывороточный и бессыво­роточный агар (при температуре 37 °С), среды с углеводами (лактозой, глюкозой, мальтозой, сахарозой, фруктозой), на 5% желчный агар, на сывороточный агар с 5 % сахарозы для определения продукции полисахарида.

Если рост культуры из отсеянных колоний достаточно обильный, то в эти сутки ставят реакцию агглютинации с группоспецифическими сыво­ротками на стекле.

На этом этапе можно поставить остальные тесты, представленные в таблицах и рекомендованные для идентификации всех видов нейссерий, а также использовать коммерческие тест-системы. В посеве на чашки из транспортной полужидкой среды выявляется в ос­новном рост культур нейссерий, идентификацию которых проводят в соответствии с изложенным выше ходом бактериологического исследования.

Четвертый день исследования.

Просматривают посевы, сделанные в предыдущий день. Учитывают результаты роста на бессывороточном и желчном агаре (при температуре 37°С), сахаролитическую активность, ставят реакцию с водным раствором Люголя на продукцию полисахари­да, проводят окончательную серологическую идентификацию менингокок­ков по реакции агглютинации. В этот день выдают окончательный положительный или отрицательный ответ. Результаты бактериологического исследования с полужидкой транспортной среды соответственно будут получены на сутки позднее.