Приложение 4. Серогруппирование менингококковых культур

Р е а к ц и я а г г л ю т и н а ц и и н а с т е к л е

c м е н и н г о к о к к о в о й к у л ь т у р о й

При использовании коммерческих диагностических менингококковых сывороток, каждую ампулу разводят физиоло­гического раствором согласно наставлению. На стекло в ряд наносят отдельными пипетками капли диагностичес­ких сывороток различных серогрупп и каплю физиологического раствора (для контроля культуры на спонтанную агглютинацию). Затем бактерио­логической петлей после ее прожигания и охлаждения берут испытывае­мую культуру, растирают рядом с каждой петлей и соединяют культуру и сыворотку. Покачивая стекло, наблюдают в вогнутом зеркале микро­скопа реакцию. Реакция агглютинации учитывается в течение 1 — 3 мин по четырехплюсовой шкале.

Заключение о принадлежности культуры к той или иной серогруппе производят на основании положительной реакции агглютинации с соот­ветствующей сывороткой при отсутствии агглютинации в контроле.

При наличии реакции с несколькими сыворотками используют разве­дения 1: 2 и 1: 4 и серогруппу микробов определяют по интенсивности ре­акции с какой-нибудь из сывороток. В ответе указать: N. meningitidis полиагглютинабельна с преобладанием серогруппы А... В случае одина­ковой реакции с несколькими сыворотками, культуру определяют как полиагглютинабельную.

Р е а к ц и я а г г л ю т и н а ц и и с м е н и н г о к о к к о в о й к у л ь т у р о й
к а п е л ь н ы м м е т о д о м

Реакцию агглютинации с исследуемым штаммом менингококков ка­пельным методом ставят на полистироловых пластинах. Сыворотки раз­водят согласно наставлению и по одной капле (0, 025 мл) вносят в каждую лунку по вертикали, число которых должно соответствовать количеству исследуемых сывороток. Затем готовят рабочую взвесь культуры. Для этого в отдельную лунку вносят две капли физиологического раствора. Запаянной изогнутой пастеровской пипеткой снимают бактериальную массу и тщательно эмульгируют в двух каплях физиологического раство­ра, внесенных в лунку. Необходимая густота взвеси обеспечивается слив­ным ростом микробных клеток на 1/8 - 1/10 части чашки Петри.

Затем, для получения рабочей густоты к микробной взвеси добавляют еще 0, 5 мл (18-20 капель) физиологического раствора. Данную рабочую взвесь разносят по одной капле в горизонтальные лунки по числу имею­щегося набора агглютинирующих сывороток. Пластины встряхивают в течение минуты. Перед учетом реакции агглютинации в каждую лунку добавляют по 1 мл физиологического раствора, что обеспечивает четкие результаты.

Специфическая реакция выявляется и учитывается в течение 0, 5-3 мин. Контролем служит лунка, в которой готовили исходную взвесь бакте­рий в физиологическом растворе.

Ответ о принадлежности культуры к той или иной серогруппе произ­водят на основании положительной реакции агглютинации с соответству­ющей сывороткой по четырехплюсовой шкале (при отсутствии агглюти­нации в физиологическом растворе). При наличии положительной реак­ции агглютинации с несколькими сыворотками серогруппу микробов оп­ределяют по интенсивности реакции с какой-нибудь из сывороток.

В случае одинаковой реакции с несколькими сыворотками культуру определяют как полиагглютинабельную. При спонтанной агглютинации культуры в физиологическом растворе реакцию не учитывают.