Приложение 6. Обнаружение антигенов менингококка в ликворе методом встречного иммуноэлектрофореза

У больного менингитом берут спинномозговую жидкость, желатель­но до применения химиотерапии. Спинномозговую жидкость центрифу­гируют, осадок отделяют и исследуют на присутствие специфического полисахаридного антигена. Для этого используют аппарат для иммуноэлектрофореза (ПЭФ-3) или любой другой марки. В аппарат заливают веронал-мединаловый буфер, содержащий в 1 л дистиллированной воды 8, 76 мединала и 1, 38 веронала, ионная сила буфера — 0, 05. Используют агар фирмы «Дифко» или агар других сортов, приготовленный на этом буфере. Для этого 1 — 1, 2-процентный агар, растопленный и остуженный до 70°С, наносят слоем в 3 мм на поверхность стеклянной пластинки, размер которой соответствует размеру рабочей поверхности аппарата (луч­ше 9 на 12см). После застывания агара пробойником или металлической трубкой (диаметром 3 мм) высекают два параллельных ряда отверстий на расстоянии 3мм друг от друга.

Ряды располагают перпендикулярно к направлению тока.

Преципитирующие менингококковые сыворотки разных серогрупп вносят в лунки, расположенные ближе к аноду (+), а осадок спинномоз­говой жидкости к катоду(—). Сыворотку каждой серогруппы вносят в отдельную лунку.

Приготовленную пластинку помещают в аппарат для иммуноэлектрофореза на 40 - 45 мин при силе тока 28—30 А. Аппарат работает при ком­натной температуре. Результат ВИЭФ считается положительным при на­личии одной-двух полос преципитации, расположенных между лункой со спинномозговой жидкостью. Учет результатов ВИЭФ можно произво­дить при подсвечивании стекла настольной лампой.

Таким образом, ВИЭФ позволяет не только определить наличие спе­цифического антигена в ликворе больного, но и установить его серологи­ческую принадлежность.

Приготовление агара для постановки реакции преципитации в ВИЭФ. Из агара готовят 2-процентную взвесь на дис­тиллированной воде. Растопленный агар разливают в ванночки слоем в 1см, остужают и нарезают кубики объемом 1см куб. Затем кубики промы­вают проточной водопроводной водой в течение 24-48 ч, затем сутки дистиллированной, которая сменяется три — четыре раза. Отмытый агар отжимают от воды, разогревают в кипящей водяной бане, фильтруют через бумажный фильтр и добавляют дистиллированную воду до перво­начального объема. К горячему полуфабрикату добавляют NаС1 до 1, 7 % в конечной концентрации и кипятят в водяной бане до полной гомогениза­ции смеси. К остывшему до 60°С агару добавляют мертиолят из расчета 1: 10 000 и разливают порциями по 50 — 100 мл во флаконы или по 10 мл в пробирки.

При наличии агара фирмы «Дифко» готовят 1 процентный его раствор на физиологическом растворе. Смесь подогревают в водяной бане при температуре 100°С до полного расплавления, затем к остуженному до температуры 60° С агару прибавляют мертиолят из расчета 1: 10 000 и разливают в сосуды.

Сосуды с агаром хранят под резиновой пробкой. Перед употреблением агар разогревают в водяной бане до полного расплавления, затем охлаждают его до температуры 70° С и заливают на стекло или в чашку Петри слоем 3 мм.