Бактериологическое исследование спинномозговой жидкости больного

Первый день исследования.

Спинномозговую жидкость в количестве 2-5 мл берут в стерильную центрифужную или агглютинационную про­бирку с соблюдением правил асептики. Взятие ликвора проводится пер­соналом в масках.

Если немедленно доставить жидкость в лабораторию невозможно, допустимо хранение образца в течение нескольких часов в термостате при температуре 37 °С. Во время транспортировки спинномозговую жид­кость следует тщательно предохранять от охлаждения — доставлять в термоизоляционном контейнере. Исследование начинают не­медленно после доставки в лабораторию. Ликвор центрифугируют при 3, 5 тыс. об/мин в течение 5 мин. Стерильной пастеровской пипеткой со дна пробирки берут 0, 3-0, 5 мл материала и по две-три капли засевают в две чашки на поверхность предварительно подогретых питательных сред и растирают шпателем. В одной чашке берется одна из агаровых сред с компонентами крови (кровяной, сывороточный или «шоколадный» агар), а в другой — простой агар. Посевы выдерживают в термостате при температуре 37°С при повышенном содержании СО2 (см. прило­жение 5).

Спинномозговую жидкость, оставшуюся в пробирке, используют для посева на среду «обогащения» (полужидкий агар) и одновременно в ВИЭФ-реакции встречного иммуноэлектрофореза (см. приложение 6).

Оставшийся в пипетке материал используют для приготовления двух мазков. Мазки после фиксации окрашивают метиленовой синью или по Граму в модификации Калины. Прямая микроскопия окрашенных мазков спинномозговой жидкости в части случаев позволяет установить на­личие менингококков или других бактерий, вызывающих гнойный менин­гит. Морфология менингококков описана выше Н. fluenzae представлена мелкими грамотрицательными палочками, окруженными еле замет­ной капсулой. Пневмококки обычно имеют вид ланцетовидных капсульных диплококков и образуют короткие цепочки Они грамположительны, хорошо красятся всеми анилиновыми красками, при этом капсула оста­ется неокрашенной.

Результаты бактериоскопии немедленно сообщают лечащему врачу в виде предварительного ответа.

Второй день исследования.

Независимо от результатов бактериоскопии просматривают засеянные чашки — визуально и с помощью бино­кулярного стереоскопического микроскопа-лупы типа.

Возбудители, находящиеся в ликворе, вырастают в виде чистой культуры. Наличие роста колоний на кровяном или «шоколадном» агаре и отсутствие роста на простых средах указывает, что культура относится к одной из патогенных групп микробов: менингококкам, пневмококкам, пиогенному стрептококку, гемофилам и др.

На кровяном агаре колонии нежные, слегка сероватого или серовато-белого цвета, с блестящей поверхностью и ровными краями, имеют мас­лянистую консистенцию. Менингококки не лизируют эритроциты (кроме эритроцитов лошади), поэто­му среда при их росте не меняется. На «шоколадном» агаре колонии ме­нингококков имеют такую же морфологию, как на кровяном агаре, но меньшую величину.

Из колоний делают мазки, красят по Граму в модификации Калины. На основании микроскопии мазков возможна выдача предварительного ответа. Если в мазках обнаружены грамотрицательные диплококки, это дает право отнести их к роду нейссерий и провести дифференциацию ви­дов, учитывая, что в редчайших случаях менингит может быть обуслов­лен непатогенными нейссериями и M. catarrhalis.

Гемофилы на кровяных средах вырастают в виде очень мелких проз­рачных колоний. На «шоколадном» агаре они дают более пышный рост. Колонии легко снимаются со среды. В мазках из этих колоний, окрашен­ных по Граму, видны мелкие короткие грамотрицательные кокковидные или нитевидные палочки с капсулой разной степени выраженности.

Пневмококки образуют мелкие круглые колонии, поначалу куполооб­разные, затем с плоским центром и приподнятым краем и альфа-гемолизом на кровяном агаре (в условиях повышенной концентрации СО2 может быть полный гемолиз), зеленовато-коричневая зона образуется чаще через 48 ч. В мазках из этих колоний обнаруживаются грамположительные дипло­кокки. Колонии отвивают на сектор чашки с кровяным или сывороточным агаром.

Оценка культурально-морфологических свойств, оксидазной и каталазной активности позволяет дифференцировать пневмококки от гемофилов и нейссерий. Наличие каталазной, уреазной и β -галактозидазной активности у культур дает основание дифференцировать виды гемофилов (см. таблицу 11).

В случае обнаружения пневмококков, гемофилов и стафилококков возможна выдача окончательного положительного ответа в тот же день. Если число выросших колоний мало (1-2), то их отсеивают на чашку с сывороточным агаром для накопления микробной массы, а иденти­фикацию микроба проводят еще через одни сутки (на третьи сутки от начала исследования).

Если прямой посев на чашки с питательной средой не дал роста коло­ний, то делается высев на чашки на те же среды, что при первичном вы­севе из инкубированной в термостате смеси ликвора с полужидким агаром (среда обогащения). При отрицательных результатах высев со сре­ды обогащения повторяют через 1-2 суток в течение 7 суток инкубации в термостате.

При получении роста колоний их исследование проводят тем же пу­тем, что и при прямом посеве спинномозговой жидкости.

Таблица 11