Учет результатов. Результат учитывают через 18-24 часа и 48 часов роста

Результат учитывают через 18-24 часа и 48 часов роста. Следует иметь в виду, что препарат противодифтерийной антитоксической сыворотки не является моновалентным и содержит, помимо антител к дифтерийному токсину, антитела к антигенам микробной клетки. Поэтому, при постановке пробы на токсигенность с использованием данного препарата, преципитаты могут образовываться не только в результате связывания токсина с антитоксином (специфические преципитаты), но и при взаимодействии антибактериальных антител с компонентами клетки коринебактерий дифтерии (неспецифические преципитаты). Последние могут формироваться как у токсигенных, в том числе и контрольного штамма, так и нетоксигенных штаммов коринебактерий дифтерии. Иногда отмечается появление множественных линий преципитации. Неспецифические преципитаты, как правило, слабо выражены, имеют нечеткие контуры, появляются чаще через 48-72 часа, но иногда могут появляться и на первые сутки. Критерием оценки специфичности преципитатов является слияние линий преципитации испытуемого штамма с таковыми контрольного токсигенного штамма. В тех случаях, когда у контрольного штамма формируется несколько линий преципитации, специфическими следует считать более четки и рано появляющиеся преципитаты. Поэтому просмотр чашек с пробой на токсигенность осуществляют через 18-24 часа с момента ее постановки. Если в течение данного времени у контрольного штамма линии преципитации не обнаруживаются, это свидетельствует о нарушении условий постановки реакции.

Наблюдаются следующие варианты оценки результатов реакции:

1. Испытуемые культуры коринебактерий дифтерии являются токсигенными, если образуемые ими линии преципитации сливаются или имеют тенденцию к слиянию с соответствующими специфическими линиями контрольного токсигенного штамма.

Пример постановки и учета реакции преципитации в геле для определения токсигенности коринебактерий дифтерии из 4-х анализов (№ 14, 15, 20, 26)

Рисунок 1

Условные обозначения: К - посев контрольного токсигенного штамма, С - специфические преципитаты, Н - специфические преципитаты, цифрами обозначены испытуемые штаммы (анализов).

14-1 и 14-2 - две колонии из одного анализа (№ 14) по 1/2 каждой поставлены слева от фильтровальной бумаги, справа - «бляшки» 14-3 и 14-4 из пяти колоний каждая, вся культура анализа № 14 - токсигенная. Из анализа № 15 сделано 6 «бляшек», т.к. выросло много подозрительных колоний. Слева от фильтровальной бумаги «бляшки» № 15-1, 15-2 и 15-3 из трех отдельных колоний (по 1/2 каждая) оказались токсигенными (15-1 и 15-2) и нетоксигенной (15-3). Следовательно, в анализе № 15 смешанная культура коринебактерий дифтерии - токсигенные и нетоксигенные. В анализе № 20 «бляшки» из 1/2 колонии (№ 20-1) и из двух колоний (№ 20-2). Культура из анализа № 20 - нетоксигенная. В анализе № 26-4 «бляшки» - слева № 26-1 и 26-2 (по 1/2 отдельных колоний), справа № 26-3 и 26-4 - смеси из 3-х колоний. Культура из анализа № 26 - токсигенная

2. Испытуемые культуры коринебактерий дифтерии являются нетоксигенными, если:

а) линии преципитации, образуемые испытуемой культурой, отсутствуют, при наличии специфических линий преципитации у контрольного штамма;

б) линии преципитации не могут слиться со специфическими линиями преципитации контрольного штамма, а скрещиваются или имеют тенденцию к скрещиванию с ними (неидентичные, неспецифические линии);

в) линии преципитации испытуемой культуры сливаются с неспецифическими линиями контрольного штамма;

г) линии преципитации испытуемой культуры перекрещиваются со специфическими линиями и сливаются с неспецифическими линиями контрольного штамма.

Очищенный ферментолизом и специфической сорбцией антитоксин не содержит антител к компонентам микробной клетки, и при использовании этого препарата неспецифических линий преципитации не образуется.