Среда для определения токсигенности

Мартеновский агар с мясной водой двойной концентрации

Мартеновский пептон - 0, 5 л, мясная вода - 0, 5 л, агар-агар - 15 г, уксусно-кислый натрий - 5 г, мальтоза - 3 г.

15 г агара промывают в течение рабочего дня в проточной водопроводной воде, тщательно отжимают и переносят в 1 л мартеновского бульона (0, 5 л мартеновского пептона и 0, 5 л мясной воды). Устанавливают pH 7, 8-8, 0 путем прощелачивания бульона 20%-ным раствором NaOH по бумажке с индикатором крезоловый красный, которая при этой реакции изменяет желтый цвет на розово-малиновый. Бульон кипятят в течение 10 мин, затем добавляют 0, 5% (5 г на 1 л) уксусно-кислого натрия, 0, 3% мальтозы (3 г на 1 л), проверяют pH и, если нужно, снова доводят до 7, 8-8, 0, кипятят в течение 15 мин, дают отстояться в теплом месте (в апарате Коха или термостате) 2-3 часа и фильтруют через тканевой или ватно-марлевый фильтр. Разливают в стерильные флаконы (70-80 мл) при большом объеме работы, для одноразового использования, или пробирки (10 мл) и стерилизуют однократно текучим паром в течение 30 мин.

Мартеновский пептон

Свиные желудки, желательно парные, с упругими стенками, большим количеством слизи и без катаральных явлений очищают от жира (желудки, пропитанные желчью, отбрасывают), разрезают и измельчают в мясорубке. Полученный фарш из желудков помещают в бутыли емкостью 3-5 литров и заливают подогретой до 50⁰ водой из расчета на 1 литр воды 300-500 г измельченной массы. Туда же добавляют 1% химически чистой соляной кислоты (уд. вес 1, 19). Массу хорошо перемешивают и ставят в термостат: либо на 15-18 часов (или более) при 37⁰, либо, при наличии отдельного термостата, при 42⁰ на 18 часов (или более). В течение процесса переваривания бутыль встряхивают, вначале чаще (через 1-1, 5 часа), затем реже. В хорошо переваренном пептоне на дне бутыли лежит небольшой слой мелкого темного осадка.

Полноту осаждения балластных белков можно проверить путем добавления к 5 мл профильтрованного пептона 1-2 капель 10%-ного NaOH, муть не должна появляться.

Действие фермента останавливают нагреванием в водяной бане, постепенно доводя температуру до 80⁰, устанавливаемую по показаниям термометра, погруженного в бутыль с переваром. Нагревание продолжается в течение 10 мин. Для этой цели можно использовать аппарат Коха или автоклав. Бутыли тщательно взбалтывают, закрывают ватно-марлевой пробкой с бумажным колпачком и ставят в прохладное сухое помещение для отстаивания при температуре не выше 12⁰. Пептон годен к употреблению не ранее, чем через 7 дней, когда плотно осядут взвешенные частицы.

Необходимо добавить 20 мл хлороформа на 1 л пептона для консервирования и закрыть бутыль резиновой пробкой. В таком виде пептон может храниться без стерилизации при комнатной температуре.

Мясная вода

Для приготовления мясной воды двойной концентрации желательно использовать свежее мясо молодого животного средней упитанности. Обезжиренное, освобожденное от сухожилий мясо пропускают через мясорубку, заливают водой в пропорции 1 л воды на 1 кг фарша и оставляют на ночь при 4⁰ С, утром смесь кипятят на асбестовой сетке в течение 15-20 мин с момента закипания. Готовый отвар фильтруют, фарш отжимают, полученную воду разливают в стерильные бутыли по 25-500 мл и стерилизуют текучим паром 3 дня подряд по 30 мин. Хранить при 4⁰ С.

Бумажки с индикатором крезоловый красный

0, 1 г крезолового красного растворяют в 100 мл 95%-ного спирта и оставляют при температуре 37⁰ на 24 часа, часто встряхивая. На следующий день смачивают в этом растворе полоски фильтровальной бумаги и быстро высушивают. Ярко-желтый цвет бумажек в щелочной среде переходит в разные оттенки красного.