Высокоэффективная жидкостная хроматография.

Как способ анализа сложных смесей ВЭЖХ появилась не более четверти века назад. Процесс хроматографии происходит между неподвижным твердым носителем и подвижной жидкой фазой. В качестве твердого носителя используются полимеры, обычно различные модификации силикагеля. В качестве жидкой фазы используются органические растворители и буферные растворы в различных сочетаниях. В зависимости от сочетания этих двух факторов различают прямую и обращенно-фазовую жидкостную хроматографию. Детектирование основано на различных спектральных методах (УФ-, ИК-спектроскопия, флуоресценция и т.п.). Чаще всего используется сканирующий ультрафиолетовый детектор. Не рассматривая основы теории ВЭЖХ, подробно изложенные в ряде монографий и статей, мы остановимся на пользовании ВЭЖХ в токсикологическом анализе.

Метод широко применяется в аналитической токсикологии. Импортируются автоматические системы токсикологического анализа фирм Bio-Rad (США) и REMEDI для одновременного скрининга более 760 соединений. Приборы оснащены оборудованием для пробоподготовки. Аналитический процесс и индентификация полностью автоматизированы, унифицированы, не требуют высокой квалифкации квалификации оператора. Время анализа составляет 20 минут, а скорость разделения- до 100нг/мл. Управление прибором простое, предусмотрена обширная самодиагностика неисправностей его.

Анализ включает удаление белков, разделение компонентов пробы и анализ спектральных данных, полученных со сканирующего ультрафиолетового детектора при двух длинах волн 205 и 235 нм. По окончании процесса компьютер анализирует данные и распечатывает результат на принтере. Компьютерная программа осуществляет прямой поиск, сравнивая относительные времена удерживания, главные максимумы спектра с каждой позицией базы данных, производит прямое сравнение спектров и рассчитывает библиотечные позиции, близкие к параметрам неизвестного вещества в пределах граничных условий. Далее проводится обратный поиск, сравнение нулевых значений второй производной спектра и второстепенных максимумов списка кандидатов с этими же параметрами неизвестного вещества. Кандидаты, удовлетворяющие этим критериям, остаются в списке кандидатов. Далее проводится обратный поиск, сравнение нулевых значений второй производной спектра и второстепенных максимумов списка кандидатов с этими же параметрами неизвестного вещества.

Если в списке остается один кандидат, идентификация заканчивается. Если в списке остается более одного или ни одного, идентификация не производится.Распечатка результатов анализа включает значение высоты каждого пика в условных единицах. Это позволяет провести количественную оценку каждого компонента, используя факторы пересчета, сведения по разведению образца и высоты соответствующих хроматографических пиков.