Иммунохроматографический анализ (ИХА).

ИХА является перспективным вариантом иммунохимического анализа. В литературе его еще называют «стрип-тестом», QuikStripdipstik, экспресс-тестом, тест-полосками и т.п.На рабочую зону полосок нанесены выработанные к анализируемым веществам искусственные антигены. Антитела к ним, связанные с красителем, также нанесены на полоску у линии погружения ее в исследуемый образец биологической жидкости. При погружении последней в тест-полоски она начинает мигрировать по принципу тонкослойной хроматографии. Вместе с жидкостью движутся антитела. Если в жидкости нет исследуемого антигена (токсического вещества), то антитела доходят до вторичных антигенов, связываются с ними, образуя окрашивание в тест-зоне. Если же исследуемый антиген присутствует в жидкости, он связывает антитела и окрашивания в тест-зоне не наблюдается. Отсутствие или появление окрашивания в тест-зоне свидетельствует о положительном или отрицательном результате анализа, соответственно.

В настоящее время тест-полоски производят несколько фирм. Предлагаются тесты как на отдельные группы веществ, так и на 3 или 5 групп одновременно. Чувствительность их для опиатов, метадона, кокаина, бензодиазепинов, барбитуратов составляет 300 нг/мл, каннабиноидов - 50 нг/мл, метамфетамина 500 нг/ мл, амфетамина- 1000 нг/мл.

Общей проблемой для всех иммунохимических методов является кросс-реактивность. Поскольку антитела формируют места связывания не на конкретную молекулу, а на некоторый характерный фрагмент молекулы, то и иммунная реакция может происходить с веществами, имеющими в своей структуре этот фрагмент. Поэтому при иммунном анализе определяется не конкретное вещество, а группа соединений, то есть метод имеет групповую специфичность. Положительный ответ дается, например, на опиаты (а не морфин), барбитураты (а не гексенал) и т.д. Кроме того, возможна реакция и с другими химическими соединениями, не принадлежащими к этой группе лекарств. Обычно каждый набор характеризуется относительной реактивностью к другим соединениям, что позволяет исключить возможный ложноположительный результат.

Таким образом, иммунные методы- это современные методы скринингового экспресс-анализа лекарственных и токсических веществ, требующие обязательного подтверждения другими методами исследования.

Лекция №3«Химико-токсикологическое исследование лекарственных средств»

Отравление лекарственными средствами в ветеринарии возможно при передозировке их, но и при использовании терапевтических доз, особенно при комбинированном их применении. В некоторых случаях взаимодействие лекарственных средств может привести к новым фармакологическим и токсическим эффектам, не характерным для компонентов лекарственной композиции. На ранних стадиях отравления выражено лишь неспецифическое действие фармакологических средств, что затрудняет своевременную диагностику его. Поэтому важно химико-токсикологическое исследование токсикиканта, позволяющее выяснить его природу.

Отравления барбитуратами.

Лекарственные средства этой группы используются в ветеринарной практике в качестве успокоительных, снотворных, противосудорожных и средств для наркоза. Наиболее распространенными из них являются фенобарбитал, барбитал натрия, циклобарбитал и гексобарбитал. Для изолирования этих веществ из исследуемого материала проводят экстракцию из подкисленного водного раствора хлороформом, его смесью с изопропанолом или эфиром. Экстракт упаривают, а твердый остаток, а твердый остаток растворяют в жидкой фазе. При исследовании биологической жидкости из нее предварительно осаждают белки раствором трихлоруксусной кислоты и центрифугированием.

Качественное определение барбитуратов проводят спектрофотометрически в ультрафиолетовой области, измеряя разность абсорбции щелочного раствора их при рН среды 10, 0 и 13, 0. При необходимости смесь барбитуратов фракционируют методом тонкослойной хроматографии. В качестве подвижной фазы используют смеси бензол-этилацетат (2: 1), хлороформ-изопропано-аммиак (5: 5: 1) и др. Фракции на пластине проявляют сернокислыми растворами сульфата ртути и дифенилкарбазона. Производные барбитуровой кислоты фракционируют также методами газожидкостной хроматографии с использованием полярных и неполярных жидких фаз и высокоэффективной жидкостной хроматографии с применением смеси смесей ацетонитрил-дистиллированная вода (35: 65) или раствора фосфата аммония и метанола (60: 40).