![]() Главная страница Случайная страница КАТЕГОРИИ: АвтомобилиАстрономияБиологияГеографияДом и садДругие языкиДругоеИнформатикаИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеталлургияМеханикаОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРелигияРиторикаСоциологияСпортСтроительствоТехнологияТуризмФизикаФилософияФинансыХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника |
Графический способ определения типа ингибирования
Практически для всех клеточных популяций характерно изменение скорости роста под действием ингибиторов и активаторов. Классификация ингибиторов и активаторов: 1. По мишени, на которую действует вещество: а) ингибиторы, действующие на ДНК; б) ингибиторы, действующие на РИК; в) ингибиторы синтеза белка; г) ингибиторы синтеза клеточной стенки; д) мембраноактивные вещества; е) ингибиторы энергетических процессов; ж) ингибиторы лимитирующего фермента. Чувствительность ферментов к их действию зависит от природы функциональных групп активного центра конкретного фермента. 2. По кинетике действия а) необратимые ингибиторы и активаторы; б) обратимые ингибиторы и активаторы. Также для кинетики роста клеток характерно наличие процессов ингибирования избытком субстрата и продуктом, что будет проанализировано позднее. По аналогии с ферментивной кинетикой общую схему действия эффектора R на процесс роста биомассы с лимитирующим субстратом, можно записать следующим образом:
Удельная скорость роста клеточной культуры в этом случае описывается следующим уравнением:
Рассмотрим наиболее важные с точки зрения кинетики клеточного роста случаи ингибирования и активации. 1. Полное конкурентное ингибирование В этом случае удельная скорость роста клеток описывается уравнением:
В двойных обратных координатах наблюдается пучок прямых, пересекающихся на оси ординат (рисунок 11). Рисунок 11 – Полное конкурентное ингибирование клеточного роста
2. Полное неконкурентное ингибирование При этом в двойных обратных координатах наблюдается пучок прямых, пересекающихся на оси абсцисс(рисунок 12). Рисунок 12 – Полное неконкурентное ингибирование клеточного роста
3. Неконкурентная активация Максимальная скорость роста в этом случае увеличивается:
В двойных координатах данный случай практически не отличим от случая неконкурентного ингибирования (рисунок 12).
4. Смешанные типы ингибирования и активации
Пример 3. Зависимость удельной скорости роста E.coli от концентрации ацетата в аэробных и анаэробных условиях приведена в таблице3. Определить тип ингибирования или активации. Использовать преобразованные координаты Диксона (
Таблица 3 – Зависимость удельной скорости роста E.coli от концентрации ацетата
Как видно из рисунка 13, в аэробных условиях E.coli растёт существенно быстрее, чем в анаэробных. Следовательно, кислород является активатором роста для данной культуры. Экспериментальные данные представлены в координатах Диксона (1/µ, S). Пересечение прямых, аппроксимирующих экспериментальные данные в координатах Диксона, не наблюдаются ни на одной из осей, следовательно кислород является смешанным активатором (частично конкурентным, частично неконкурентным) роста E.coli. По точкам пересечения графика в координатах Диксона с осью абсцисс определяем константы ингибирования. В аэробных условиях
|